广西优势血清西优势血清型IBV代表株M基因在杆状病毒系统中的表达

发布时间：2018-05-17 07:35

  本文选题：鸡传染性支气管炎病毒 + M基因　； 参考：《中国家禽》2017年15期

【摘要】：采用RT-PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒(IBV)广西优势血清型代表性毒株GX-YL5的膜(M)蛋白基因,将其克隆至pFastBac~(TM)/HBM-TOPO杆状病毒转移载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rHBM-M;将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒;利用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)鉴定表达的M蛋白。IFA检测可见重组杆状病毒感染后72h细胞出现特异性荧光,Westernblot检测可见大小约为26ku的特异性蛋白带,表明该重组M蛋白在Sf9昆虫细胞中成功获得表达。研究为IBVM蛋白的生物学功能、IBV诊断试剂和新型疫苗制备等奠定基础。
[Abstract]:RT-PCR was used to amplify the protein gene of the dominant serotype representative strain GX-YL5 of Guangxi, and then cloned it into the transfer vector of pFastBac~(TM)/HBM-TOPO baculovirus, and transformed into E. coli DH10Bac receptive cells. Recombinant rHBM-Mand recombinant baculovirus was obtained by transfection of rHBM-Mand into Sf9 insect cells. The expressed M protein was identified by indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western blot (Western blot). Specific fluorescent and Western blot analysis showed that the specific protein band of 26ku could be found in the cells 72 hours after the infection of recombinant baculovirus. The results showed that the recombinant M protein was successfully expressed in Sf9 insect cells. The study laid a foundation for the biological function of IBVM protein and the preparation of new vaccine.
【作者单位】： 广西大学动物科学技术学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31360611) 广西自然科学基金项目(2014GXNSFDA118011、2013GXNSFCA019010)
【分类号】：S852.65

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本文编号：1900534