贵州省地方品种鸡禽白血病病毒流行毒株的亚型鉴定及其分子特征分析

发布时间：2018-05-20 11:00

本文选题：禽白血病病毒 + 地方品种鸡　；参考：《山东农业大学》2017年硕士论文

【摘要】：禽白血病是由禽白血病病毒(Avian Leucosis Virus,ALV)引起的一种垂直传播性疾病,能够引发鸡群产生良性和恶性肿瘤,导致其生产性能下降和免疫抑制。ALV可以分为A-J十个亚群,以及新鉴定的K亚群。其中,J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)在鸡群中引起的以髓细胞样细胞瘤为主要病理表现的肿瘤病,其发生率最高,给养鸡业造成了巨大损失。到目前为止,无任何可预防和治疗的药物,为减轻该病毒对养鸡业的危害,不断加强对各省市地方品种鸡群AL的净化工作成为重中之重。近年来,ALV不仅在罗曼褐蛋鸡、海兰蛋鸡中流行,而且在我国各地区不同品种鸡中广泛传播,影响了我国地方品种鸡的健康发展。贵州省处于云贵高原东部,水草丰沛,生态气候条件优越,孕育了黔东南小香鸡,威宁鸡、竹香鸡和长顺绿壳蛋鸡等优良贵州地方品种鸡,是我国鸡种资源基因库的宝贵资源。经研究发现,我国在2005年和2008年有关于贵州省部分地方规模化养殖场鸡群AL的相关报道,但近年来贵州省地方品种鸡群AL的病原学调查研究较少。为了解2016年贵州省地方品种鸡AL感染情况及其主要流行亚型,本研究通过对2016年2月至4月份采集的贵州省八个地区9个地方品种鸡鸡蛋样品,进行ALV的病原学检测和确定其主要流行亚型,完成对贵州省地方品种鸡ALV感染情况探究。为了解贵州省ALV感染情况,利用ALV-P27抗原ELISA检测试剂盒对贵州省八个地区威宁鸡,竹香鸡、长顺绿壳鸡及部分地方土鸡等9个地方品种鸡380份鸡蛋进行检测。采集卵白,使用ALV-P27抗原检测试剂盒检测卵白中ALV群特异性P27抗原,结果显示贵州省八个地区的卵白中ALV-P27抗原阳性率为14.7%(56/380),其中安顺、遵义、六盘水、长顺、黔东南五个地区的品种鸡群有禽白血病感染,贵阳、黔西南、毕节三个地区的品种鸡群未发现有禽白血病感染,而来自安顺、长顺、遵义三个地区的绿壳蛋鸡ALV阳性率较高,为26.7%~36%。将卵白ELISA试剂盒检测ALV-P27抗原为阳性的56份样品,分别接种CEF和DF-1细胞培养后,使用ELISA、IFA、PCR以及卵白中提取RNA进行RT-PCR检测方法进行重复验证,探究同一批ALV阳性样品不同实验方法的复核结果。结果显示,DF-1和CEF细胞的检测结果相同,有15个样品为阳性,阳性率为26.8%(15/56),表明存在外源性ALV,细胞培养后细胞上清中ALV-P27抗原的检出率降低,可能因为在细胞培养过程中,细胞培养上清中的病毒量达不到ELISA方法检出ALV-P27抗原的最低病毒量。本结果为禽白血病净化方法的进一步完善提供了重要的数据,我们建议在AL净化时,如果条件允许应该增加样品细胞培养后的PCR方法检测,有利于降低ALV的漏检率。同时使用Trizol法和组织RNA提取试剂盒两种方法提取卵白RNA,将提取好的RNA反转录成cDNA,进行PCR检测均未检测到ALV,可能由于卵白中RNA病毒含量较少,这种检测方法目前还不能用于生产中阳性样品的复核。卵白ELISA试剂盒检测ALV-P27抗原为阳性的样品,分别接种CEF和DF-1细胞培养来分离病毒,7d后检测细胞上清中ALV-P27抗原、感染细胞cDNA用4对ALV引物进行PCR鉴定与分型。并选取9个鸡群的部分ALV分离株进行gp85基因的克隆测序与序列分析。结果表明,56个阳性卵白的细胞培养上清阳性率为26.8%(15/56);56个阳性卵白接种的CEF和DF-1均扩增出ALV,并鉴定出其亚型全部为J亚型(ALV-J)。已测序的21株ALV-J gp85基因同源性比较表明,分离株之间为98.4%~100%,和国内外ALV-J参考株之间为86.6%~100%;进化树分析显示,21株ALV-J分离株在不同的分支,其进化关系和来源之间未发现明显规律。本研究补充了地方品种鸡流行病学调查资料,对贵州省AL净化和防控工作具有重要的参考意义。本研究使用不同方法对同一批ALV阳性样品进行检测的实验探索,为加快种禽场禽白血病净化进程以及疫苗产品的SPF化提供了有力的依据。
[Abstract]:Avian leukosis is a kind of vertical spread disease caused by avian leukosis virus ( ALV ) . It can trigger chicken colony to produce benign and malignant tumor , and it can be divided into two kinds of chicken eggs in Guizhou province . The results showed that the positive rate of ALV - 27antigen was detected by ELISA , IFA , PCR and egg white . The results showed that the positive rate of ALV - 27antigen was detected by ELISA , IFA , PCR and egg white .
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.31

【相似文献】