伪狂犬病病毒变异株gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2018-05-27 16:23

  本文选题：伪狂犬病毒 + 变异株　； 参考：《中国动物传染病学报》2017年03期

【摘要】：为制备伪狂犬病病毒变异株gE蛋白的单克隆抗体,PCR扩增伪狂犬病病毒gE蛋白主要抗原表位区的基因片段,并将其克隆至原核表达载体p Cold-TF。经1 mmol/L IPTG低温诱导,表达了约90 k Da的gE融合蛋白。融合蛋白用镍离子金属亲和层析柱纯化后,免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,经细胞融合和筛选,获得了2株稳定分泌抗gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(5B2和6E6)。间接免疫荧光试验(indirect immunofl uorescence assay,IFA)显示2株单克隆抗体均能与PRV变异株(JS-2012)反应,但与gE缺失的疫苗毒Bartha-K61株无反应。Western blot结果显示5B2和6E6与gE蛋白不反应,提示2株单克隆抗体针对的可能是gE蛋白的构象表位。本研究获得的gE蛋白单克隆抗体为伪狂犬病病毒变异株的鉴定与功能研究以及野毒株和疫苗株的鉴别诊断提供了良好的工具。
[Abstract]:In order to prepare the monoclonal antibody against GE protein of pseudorabies virus variant strain, the gene fragment of the main epitope of GE protein of pseudorabies virus was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pCold-TF. After 1 mmol/L IPTG induction, 90 kDa GE fusion protein was expressed. The fusion protein was purified by nickel ion affinity chromatography and immunized with 6-week-old BALB/c female mice. Two hybridoma cells secreting monoclonal antibodies against GE protein were obtained by cell fusion and screening. Indirect immunofluorescence assay (IFA) showed that both monoclonal antibodies could react with PRV variant strain JS-2012, but not with Bartha-K61 strain of GE deficient vaccine virus. Western blot results showed that 5B2 and 6E6 did not react with GE protein. These results suggest that the two McAbs may target the conformational epitopes of GE protein. The monoclonal antibody to GE protein obtained in this study provides a good tool for the identification and functional study of pseudorabies virus variants and the differential diagnosis of wild and vaccine strains.
【作者单位】： 中国农业科学院上海兽医研究所;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：上海市闵行区人才发展专项基金 上海市自然科学基金项目(14ZR1448900) 上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2015)第1-7号,沪农科攻字(2016)第4-2号) 国家生猪现代产业技术体系项目(CARS-36)
【分类号】：S852.65

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1942913