如皋黄鸡新基因LBC多抗的制备及其亚细胞定位

发布时间：2018-05-27 17:16

  本文选题：如皋黄鸡 + 新基因LBC　； 参考：《中国兽医学报》2017年06期

【摘要】：克隆如皋黄鸡LBC(Libichun)基因CDS区,通过GFP-LBC融合蛋白和间接免疫荧光法(IFA)来实现该基因的亚细胞定位,为其基因功能研究奠定基础。提取如皋黄鸡18日龄的鸡胚睾丸RNA,巢式PCR方法扩增LBC基因的CDS区,构建真核表达载体pEGFP-N1-LBC转染DF-1细胞,48h后观察其绿色荧光表达情况,同时制备LBC基因的多克隆抗体,利用IFA标记LBC基因的表达部位。本研究成功克隆出如皋黄鸡LBC基因的完整编码区,成功制备抗体和构建pEGFP-N1-LBC、pcDNA3.0-LBC。GFP-LBC融合蛋白和IFA的结果显示,如皋黄鸡LBC基因在细胞质和细胞核中都有表达,为下一步LBC基因的功能研究奠定了基础。
[Abstract]:Clone Rugao yellow chicken LBC (Libichun) gene CDS region, through GFP-LBC fusion protein and indirect immunofluorescence (IFA) to realize the subcellular localization of the gene, and lay the foundation for its gene function research. Extract RNA of chicken embryo from 18 day old chicken embryo of Rugao yellow chicken and amplify CDS region of LBC gene by nested PCR method and construct eukaryotic expression vector pEGFP-N1-LBC transfection. DF-1 cells, after 48h, observe its green fluorescence expression, and prepare polyclonal antibody of LBC gene, and use IFA to mark the expression site of LBC gene. This study successfully cloned the complete coding region of the LBC gene of Rugao yellow chicken. The successful preparation of antibodies and the construction of pEGFP-N1-LBC, pcDNA3.0-LBC.GFP-LBC fusion protein and IFA showed that Rugao yellow was yellow. The chicken LBC gene is expressed in both cytoplasm and nucleus, which lays the foundation for further research on the function of LBC gene.
【作者单位】： 扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31301959,31272429,31472087) 高等学校博士学科点专项科研基金资助课题资助项目(20123250120009) 中国博士后基金资助项目(2012M511326,2014T70550) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 大学生创新创业训练计划资助项目(201411117033Z)
【分类号】：S831

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1943084