牛种布鲁氏菌2308基因缺失株经紫外线照射后对昆明系小鼠的免疫效果研究

发布时间：2018-05-28 22:42

  本文选题：牛种布鲁氏菌2308 + 缺失株　； 参考：《石河子大学》2015年硕士论文

【摘要】：布鲁氏菌是一种革兰氏阴性胞内寄生菌,对人和动物易感,近些年,我国布病的发病率正在呈上升趋势,对经济和健康带来了严重的危害,但是现有疫苗仍然存在一定缺陷,为了能够研制出一种新型疫苗,本试验采用传统的物理方法对牛种布鲁氏菌2308缺失株进行诱变,缺失株为本试验室所构建,将2308△ery、2308△wbkA、2308△omp25缺失株在37℃摇床中培养至OD值为0.6左右,用PBS稀释至10-3后,用移液器吸取50μL在布鲁氏菌固体培养基上涂匀,然后在紫外灯下30cm处分别照射0min、4min、6min、8min、10min后放入37℃恒温培养箱3~5d,挑取单菌落,至此为第一代,共诱变20代,然后送至中国疾控中心进行生化鉴定。为了检测牛种布鲁氏菌2308紫外诱变株毒力和免疫效果,本试验以S19疫苗株为对照,用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外线照射组(2308△rwbkA、2308△romp25、和2308△rery)和非照射组(2308△wbkA、2308△omp25、和2308△ery)分别侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7,对小鼠巨噬细胞内的细菌进行计数评价毒力致弱情况;用牛种布鲁氏菌基因缺失株紫外照射组、非照射组以及S19疫苗株分别以1×107CFU/0.2mL免疫4~6周龄昆明系小鼠,通过ELISA检测小鼠血清中布鲁氏菌IgG抗体和IFN-γ细胞因子,同时分离脾脏,CFU计数布鲁氏菌胞内菌数量;用2308强毒株以3×108CFU/0.2mL腹腔感染各组免疫10周后小鼠,脾脏CFU评价各受试组小鼠的免疫效果。结果表明:在细胞水平,紫外线照射后的布鲁氏菌基因突变株其CFU较紫外线非照射组有不同程度的下降,统计学分析无显著性差异(P0.05),但均高于S19胞内菌CFU;与S19疫苗株相比,2308△rwbkA和2308△rery紫外线照射组与其对应的2株紫外线非照射组在不同检测阶段,其IgG和IFN-γ含量水平相当,但2308△romp25紫外线照射菌株组在第6、8周,其IgG和IFN-γ含量均高于2308△omp25紫外线非照射菌株组和S19免疫组,统计学分析有显著性差异(0.01P0.05);攻毒试验表明:经过紫外照射的romp25缺失株产生的保护力高于其它未经过紫外照射的缺失株,但低于S19疫苗株免疫效果。结论:紫外诱变株romp25毒力进一步降低而且能够产生一定的保护效果。
[Abstract]:Brucella is a Gram-negative intracellular parasite, susceptible to human and animal diseases. In recent years, the incidence of brucellosis in China is on the rise, which has brought serious harm to economy and health, but the existing vaccines still have some defects. In order to develop a new vaccine, the traditional physical method was used to mutagenic the 2308 deletion strain of Brucella bovis, which was constructed in our laboratory. The missing strain of 2308 liter 2308 wbkAn 2308 omp25 was cultured in 37 鈩，

本文编号：1948467