ORFV-Yulin株的分离鉴定及其B2L基因在昆虫杆状病毒系统中的表达

发布时间：2018-05-29 16:37

  本文选题：羊口疮病毒 + BL基因　； 参考：《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2017年09期

【摘要】：【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名为ORFV-Yulin株;扩增的B2L全长基因长度为1 137bp,与Hub13和GY-AHF10株亲缘关系最近,核苷酸序列和氨基酸序列的相似性分别为99%和99.2%。通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了B2L基因,获得了47ku的重组蛋白。【结论】从榆林市陕北白绒山羊中获得了羊口疮病毒分离株(ORFV-Yulin);通过昆虫杆状病毒表达系统成功表达了ORFV-Yulin株的B2L基因。
[Abstract]:[objective] to isolate Orf virus Orf virus ORFV from scab material of Northern Shaanxi White Cashmere Goat with typical symptoms of aphthous ulcer in Yulin City, and clone and analyze its B2L gene sequence. B2L gene was expressed by baculovirus. [methods] ORFV was isolated and cultured by bovine kidney passage cells. The full-length B2L gene was amplified from the isolated virus by PCR, and sequenced and genetic evolution was analyzed. The insect baculovirus expression vector was constructed by using the amplified B2L gene. The baculovirus was packaged and infected with sf9 cells. The expression of the target gene was confirmed by SDS-PAGEG Western-blot and mass spectrometry. [results] A sheep aphtha virus strain named ORFV-Yulin strain was successfully isolated, and the amplified B2L full-length gene length was 1137 BP, which was closely related to Hub13 and GY-AHF10 strains. The similarity of nucleotide sequence and amino acid sequence was 99. 2% and 99. 2%, respectively. B2L gene was successfully expressed by baculovirus expression system. The recombinant protein of 47ku was obtained. [conclusion] the isolate of sheep mouth sore virus (ORFV-Yulin) was obtained from Shanbei white cashmere goat in Yulin city, and the B2L gene of ORFV-Yulin strain was successfully expressed by insect baculovirus expression system.
【作者单位】： 内蒙古农业大学兽医学院;榆林学院生命科学学院;武汉中拓康明生物科技有限公司;
【基金】：陕西省科技厅农业科技创新与攻关项目(2016NY-120);陕西省科技厅重大统筹项目(2014KTDZ02-01) 陕西省教育厅专项科研计划项目(14JK1860) 榆林学院重点项目(14YK41)
【分类号】：S852.654

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本文编号：1951626