犬β-防御素cBD103的原核表达和纯化

发布时间：2018-05-31 17:22

  本文选题：犬β-防御素 + 原核表达　； 参考：《动物医学进展》2017年05期

【摘要】：将犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果表明,质粒pET-cBD103经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,大肠埃希菌中成功表达出目的蛋白,蛋白大小约为24ku,以可溶性表达为主。经过纯化和酶切,得到大小8ku的cBD103,与预期大小一致。该研究在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,为下一步大规模制备cBD103奠定了基础。
[Abstract]:The canine 尾 -defensin (103(canine 尾 -defensin 103) gene was subcloned into the prokaryotic expression vector pET-32a (pET-cBD103). The recombinant plasmid pET-cBD103 was transformed into Escherichia coli BL21 receptive cells. The protein was purified by Ni-NTA affinity chromatography. The expressed product and purified product were identified by SDS-PAGE of enterokinase digested fusion protein. The results showed that the plasmid pET-cBD103 was correctly constructed by PCR and double enzyme digestion, and the target protein was successfully expressed in Escherichia coli. The protein size was about 24ku.Soluble expression was dominant. After purification and enzyme digestion, cBD103 of the size of 8ku was obtained, which was in accordance with the expected size. This study expressed the target protein in Escherichia coli and laid a foundation for the further preparation of cBD103.
【作者单位】： 公安部南京警犬研究所警犬技术公安部重点实验室;南京农业大学动物医学院;
【基金】：江苏省自然科学基金面上项目(BK2010099) 公安部应用创新计划项目(2010YYCXNJJQ151)
【分类号】：S852.2

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本文编号：1960670