鸡新城疫病毒中和单克隆抗体的制备及鉴定

发布时间：2018-06-15 18:24

  本文选题：鸡新城疫病毒 + 单克隆抗体　； 参考：《河南农业科学》2017年01期

【摘要】：采用差速离心法纯化鸡新城疫病毒(NDV)标准毒株F48E8,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞技术制备抗NDV单克隆抗体,旨在为NDV中和抗原表位分析奠定基础。将NDV感染BHK-21细胞,建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)的单克隆抗体检测方法,筛选获得14株分泌抗NDV单克隆抗体杂交瘤细胞株,其单克隆抗体腹水IPMA效价均在0.50×10-2~2.56×10-5(F48E8株和La Sota株)。血凝抑制试验(HI)结果表明,单克隆抗体1G6、2C1、4D2、5F2和13A5具有血凝抑制活性,其HI效价在(6~12)log2(F48E8株)和(9~11)log2(La Sota株)。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体5F2和13A5对F48E8株和La Sota株均有明显的病毒中和活性,中和效价分别为1∶400~1∶800和1∶25。夹心ELISA结果表明,单克隆抗体5F2识别NDV HN蛋白,13A5识别F蛋白。综上,成功制备了具有中和活性的NDV单克隆抗体(5F2和13A5)。
[Abstract]:The standard strain F48E8 of Newcastle disease virus (NDV) was purified by differential centrifugation. Balb / c mice were immunized. Monoclonal antibodies against NDV were prepared by hybridoma cell technique in order to lay a foundation for the neutralization epitope analysis of NDV. BHK-21 cells were infected with NDV, and a monoclonal antibody assay was established for the detection of IPMA. Fourteen hybridoma cell lines secreting anti-NDV monoclonal antibodies were obtained. The titers of monoclonal antibody IPMA in ascites were 0.50 脳 10 ~ (-2) and 2.56 脳 10 ~ (-5) F _ (48) E _ (8) and La Sota strains respectively. The results of hemagglutination inhibition test (HI) showed that monoclonal antibody 1G6O2C1O4D2O5F2 and 13A5 had hemagglutination inhibitory activity, and the HI titers of the two antibodies were compared with that of Y6G612log2F48E8 strain. The results of neutralization test showed that monoclonal antibodies 5F2 and 13A5 had obvious viral neutralization activities against F48E8 strain and La Sota strain, the neutralization titers were 1: 400, 1: 800 and 1: 25, respectively. Sandwich Elisa showed that monoclonal antibody 5F2 recognized NDV HN protein 13A5 and recognized F protein. In conclusion, neutralizing NDV monoclonal antibodies 5F2 and 13A5 were successfully prepared.
【作者单位】： 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;河南省农业科学院农业经济与信息研究所;河南农业大学牧医工程学院;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：国家重点研发计划项目(2016YFD0500800) 公益性行业(农业)科研专项(201303033) 河南省科技攻关项目(162102110051)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2023076