坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

发布时间：2018-06-17 20:25

  本文选题：鸭坦布苏病毒 + NS蛋白　； 参考：《畜牧兽医学报》2016年05期

【摘要】：为了建立坦布苏病毒(TMUV)感染鸭群的抗体检测方法,以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET-28a(+),利用BL21(DE3)表达NS1蛋白,纯化后其质量浓度为4.16μg·μL~(-1)。通过方阵试验,确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100ng·孔-1,检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化,优化后的结果:抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜;酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍,37℃作用1h;阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测,其检测结果显示,该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上,且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测,描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律,为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法,尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。
[Abstract]:In order to establish an antibody detection method for tambusuvirus (TMUV) infected ducks, an indirect Elisa method was established using the prokaryotic expression protein of TMUV NS1 as the coated antigen, and the detection conditions were optimized. The whole gene sequence of TMUV NS1 was cloned into pET-28a (pET-28a, BL21DE3) to express NS1 protein. After purification, the mass concentration of NS1 was 4.16 渭 g / L. The best coating concentration of NS1 protein was determined to be 100ng pore -1 by square array test, and the best dilution multiple of serum was 40 times. Then the detection conditions were optimized. The results showed that the best coating condition of antigen was 4 鈩，

本文编号：2032339