猪细小病毒1型VP2基因的原核表达及反应原性分析

发布时间：2018-06-22 12:51

  本文选题：猪细小病毒型 + VP基因　； 参考：《生物技术通报》2017年03期

【摘要】：旨在研究猪细小病毒1型(PPV1)VP2蛋白(第155-439位氨基酸)的抗原性,为开发PPV1的检测方法奠定基础。以PPV1型AV31株的DNA为模板,扩增获得849 bp的目的片段,扩增产物克隆入p ET30a(+)原核表达载体,构建p ET30aPPV1-VP2(155-439 aa)重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3);在37℃,以1 mmol/L IPTG诱导表达6 h;采用Ni-NTA树脂亲和层析纯化重组蛋白,并用不同浓度的尿素对纯化蛋白进行复性。SDS-PAGE分析表明,该VP2编码基因在大肠杆菌中得到表达,蛋白大小约为39 k D;Western blot检测结果表明,该重组蛋白与PPV1阳性血清发生特异性反应,与NA-PRRSV和PCV2阳性血清不发生交叉反应。该实验成功构建了PPV1-VP2(155-439 aa)原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的表达,纯化后的复性蛋白具有较好的反应原性。
[Abstract]:The aim of this study was to study the antigenicity of porcine parvovirus type 1 (PPV1) VP2 protein (amino acid at 155-439) and to lay a foundation for the development of detection methods for PPV1. Using the DNA of PPV1 AV31 strain as template, the target fragment of 849 BP was amplified and cloned into prokaryotic expression vector pET30a (). The recombinant plasmid pET30aPPV1-VP2 (155-439aa) was constructed and transferred into E. coli BL21 (DE3) at 37 鈩，

本文编号：2052894