苦马豆素单克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2018-06-22 15:40

  本文选题：苦马豆素 + 单克隆抗体　； 参考：《中国畜牧兽医》2017年07期

【摘要】：本试验采用苦马豆素(swainsonine,SW)人工抗原SW-OVA免疫接种BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立了1株能稳定分泌SW单克隆抗体的杂交瘤细胞1F10,杂交瘤细胞染色体数目为45~50对。经间接ELISA检测,该株细胞培养上清中抗体效价为1∶25 600,诱生腹水效价为1∶80 000。单克隆抗体的亚型为IgG1,亲和力解离常数为1.14×1010,腹水抗体纯化后纯度可达98%,回收率80%,SDS-PAGE凝胶电泳可见单克隆抗体的轻链、重链分子质量分别为25和50ku,Western blotting检测抗体能特异性的识别SW。其线性检测范围为4~128μg/mL(R2=0.9969),与BSA、明胶、多聚赖氨酸、α-甘露糖苷等无交叉反应。本试验制备的SW单克隆抗体为免疫学检测SW和免疫学防制家畜疯草中毒奠定基础。
[Abstract]:In this experiment, BALB / c mice were immunized with swainsonine SW artificial antigen SW-OVA. A hybridoma cell line 1F10 was established by hybridoma technique. The chromosome number of hybridoma cells was 4550 pairs. The antibody titer of the supernatant was 1:25 600 and the induced ascites titer was 1:80 000 by indirect Elisa. The subtype of monoclonal antibody was IgG1, the affinity dissociation constant was 1.14 脳 10 ~ (10), and the purity of purified ascites antibody could reach 98. The recovery rate of 80% SDS-PAGE gel electrophoresis showed the light chain of monoclonal antibody, and the molecular weight of heavy chain was 25 and 50ku-Western blotting, respectively. The linear detection range was 4 ~ 128 渭 g / mL (R ~ (2 +) 0.9969), and there was no cross reaction with BSA, gelatin, poly-lysine, 伪 -mannoside and so on. The SWmonoclonal antibody prepared in this study lays a foundation for immunological detection of SW and immunological control of poisoning of wild grass in domestic animals.
【作者单位】： 塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(31460678) 国家星火计划项目(2015GA891015) 兵团塔里木畜牧科技重点实验室开放课题(HS201207)
【分类号】：S856.9

【参考文献】

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本文编号：2053307