共表达ETEC K99、GFP重组大肠杆菌的构建及表达
本文选题:ETEC + K ; 参考:《生物技术》2017年06期
【摘要】:[目的]构建K99、GFP基因重组质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)感受细胞中表达。[方法]利用PCR扩增技术扩增K99基因和GFP基因,经连接和转化将目的片段克隆到pLA载体上,利用双酶切技术及PCR技术对重组质粒进行鉴定并测序分析,利用Western Blot技术分析蛋白质表达情况。[结果]测序分析结果表明,基因具有正确的阅读框;双酶切和PCR鉴定得到498 bp和720 bp的特异性条带;荧光检测表明重组菌表达了蛋白;Western Blot结果表明重组菌表达为融合蛋白。[结论]成功构建了大肠重组菌,并表达外源融合蛋白。
[Abstract]:[objective] to construct the recombinant plasmid of K99 GFP gene and express it in BL21 (DE3)-receptive cells of Escherichia coli. [methods] K99 gene and GFP gene were amplified by PCR and cloned into pLA vector by ligation and transformation. The recombinant plasmid was identified and sequenced by double enzyme digestion and PCR. Protein expression was analyzed by Western blot. [results] sequencing analysis showed that the gene had the correct reading frame, the specific bands of 498bp and 720bp were identified by double enzyme digestion and PCR, and the recombinant strain expressed protein by Western blot. [conclusion] Recombinant Escherichia coli was successfully constructed and expressed exogenous fusion protein.
【作者单位】: 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院;黑龙江八一农垦大学动物科技学院;
【基金】:黑龙江省自然科学基金项目(“ETEC K99特异性s Ig A-抗原复合物反向转运的黏膜免疫机制”,No.C2017047) 黑龙江省垦区科研课题(“规模化猪场病毒性腥泻新型黏膜疫苗的应用与示范”,No.HNK135-04-06-04) 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(“针对ETEC K99的特异性SIg A免疫排除功能研究”,No.YJSCX2015-Y59)
【分类号】:S852.61
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,本文编号:2097282
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