表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定

发布时间：2018-07-12 08:11

  本文选题：略阳乌鸡 + 鸡α-干扰素　； 参考：《动物医学进展》2017年09期

【摘要】：通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。
[Abstract]:By constructing the eukaryotic expression vector of chicken interferon 伪, a yeast engineering strain capable of expressing chicken interferon 伪 was obtained. Firstly, according to the sequence of chicken interferon 伪 gene published by GenBank, the sequence of chicken interferon 伪 gene was amplified by PCR using the genomic DNA of Lueyang silky chicken as template. Then, chicken interferon 伪 gene was inserted into eukaryotic expression vector by gene recombination technique. The target vector was determined by colony PCR and DNA sequencing. The target vector was successfully constructed and transformed into Saccharomyces cerevisiae AH109. The recombinant yeast strain with JMB440-ChIFN- 伪 vector was identified by plasmid extraction and PCR. Finally, through yeast culture, SDS-PAGE electrophoresis and Western blot, the chicken interferon 伪 gene was recombined with yeast strain and expressed interferon 伪. The protein band size was about 23ku. the result was consistent with the expected results. The results showed that the engineering yeast strain expressing chicken interferon gene was successfully constructed.
【作者单位】： 陕西理工大学生物科学与工程学院;
【基金】：陕西省农业科技创新与攻关项目(2016NY-084)
【分类号】：Q78;S831

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本文编号：2116526