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旋毛虫四种丝氨酸蛋白酶抑制剂转录水平的表达和虫体定位的研究

发布时间:2018-07-16 20:42
【摘要】:旋毛虫是一种全球范围分布的危害严重的食源性人兽共患寄生虫病。主要发病原因是因为宿主食用了生的或未熟的含有感染性包囊的肉类食品而感染,感染严重时可致死亡。几乎所有的哺乳动物均可以被感染。近年相继在几种寄生虫分离并鉴定除了丝氨酸蛋白酶抑制剂家族。研究表明,丝氨酸蛋白酶抑制剂具有独特的酶抑制活性,能够保护寄生虫抵制宿主消化液的消化,参与寄生虫在宿主体内的移行过程,能够利于寄生性线虫的发育并抵抗宿主的免疫反应。根据NCBI上已发表的旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂Tsp Ad5、TS11-1、Tsp03044、Tsp03548(其基因序列登录号分别为:EU263307、AF231948.1、XM_003379333、XM_003379851)设计实时荧光定量引物,应用分子生物学技术分别将克隆的目的片段与p MD-18T克隆载体连接后,各自转化入克隆感受态细胞DH5α中。经菌液PCR鉴定和测序公司测序后对克隆到的序列进行序列分析正确,随后制备相应的标准品,并建立相对应的实时荧光定量标准曲线。为阐明四种Ts-SPI在旋毛虫不同发育时期虫体内转录水平表达量的情况,将收集的不同时期的旋毛虫虫体提取总RNA进行RT-PCR,分析不同发育时期里旋毛虫四种Ts-SPI基因在mRNA水平的表达量差异。结果显示,Tsp Ad5和TS11-1在旋毛虫感染后3d的成虫期出现一个转录高峰,3d时表达量明显高于1d和5d的表达量(p㩳0.01),5d时较NBL略低(p0.05);成囊前期,表达量很低,其中18d时表达量最低(p㩳0.05);另一高峰出现在感染后第38天的肌幼虫时期,且差异具有显著性(p㩳0.05)。Tsp03044在成虫时期,3d时的转录水平表达量明显高于其他时期的表达量且差异具有极显著性(p㩳0.01);成囊前期中18d时表达量最低(p㩳0.05),22d时转录出现高峰(p㩳0.01),差异极显著。Tsp03548在3d时转录略高于1d和5d的表达量(p㩳0.05),5d时较NBL略低(p㩳0.05)且具有差异显著性;成囊前期中18d时出现转录表高峰(p㩳0.01);肌幼虫时期均有表达(p㩳0.05)且差异显著。本实验应用免疫荧光技术研究四种Ts-SPI在旋毛虫不同发育时期虫体内分布的情况,并对四种Ts-SPI与宿主的相互作用进行分析。免疫荧光定位结果显示,TspAd5和TS11-1在成虫表皮组织和肌肉虫的表皮和体内均大量表达,在新生幼虫和成囊前期幼虫的虫体也有表达。Tsp03044在新生幼虫的虫体的体内和表皮表达量略少,在其他时期的体内均明显可见其红色荧光效果显著。Tsp03548明显可见定位于成囊前期幼虫的表皮组织和体内;成虫的表皮组织和新生幼虫的虫体的表皮和体内也有表达,但整体红色荧光效果很弱;肌幼虫的体内和表皮也均有表达。本实验对四种Ts-SPI在旋毛虫不同发育时期虫体内转录水平表达量和虫体分布的情况进行研究,通过应用实时荧光定量PCR和免疫荧光定位技术对Tsp Ad5、TS11-1、Tsp03044、Tsp03548在不同发育时期转录水平表达量变化和虫体表达部位的进行分析,不仅为阐明旋毛虫不同发育阶段的蜕变机制奠定基础,也为阐明旋毛虫侵袭宿主的过程中的免疫逃逸机制以及新型的抗旋毛虫及相关寄生虫药物研发打下结实基础。
[Abstract]:The results showed that Tsp Ad5 and TS11 - 1 were able to inhibit the development of parasitic nematodes and to resist the immune response of host . The results showed that Tsp Ad5 and TS11 - 1 were able to inhibit the development of parasitic nematodes and to resist the immune response of hosts .
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.7

【参考文献】

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本文编号:2127614

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