TALEN介导猪瘟病毒结构蛋白基因E0敲入山羊乳腺上皮细胞β-乳球蛋白基因座

发布时间：2018-07-31 07:45

【摘要】：验证整合于山羊β-乳球蛋白基因座的猪瘟病毒E0(CSFV E0)基因是否能够利用内源性启动子调控该基因表达,为制备转CSFV E0基因山羊做好准备。利用脂质体转染的方法将实验室已构好的针对山羊β-乳球蛋白基因第一外显子的TALENs表达载体和包含CSFV E0基因的打靶载体共转染山羊乳腺上皮细胞,用药物(G418)进行筛选获得单克隆,并对获得的克隆进行5′端和3′端鉴定,鉴定都为阳性的克隆进行激素诱导24h后,收集培养液和细胞。通过RT-PCR和Western blot技术检测证明,转基因阳性细胞能够表达并分泌出CSFV E0蛋白。本试验为以转CSFV E0基因细胞为供核体进行核移植制作转基因动物奠定了基础。
[Abstract]:To verify whether the CSFV E0 gene integrated into goat 尾 -lactoglobulin locus could regulate the expression of the gene by endogenous promoter, so as to prepare the transgenic goat with CSFV E0 gene. Goat mammary epithelial cells were co-transfected into goat mammary epithelial cells by liposome transfection of TALENs expression vector targeting goat 尾 -lactoglobulin gene exon 1 and targeting vector containing CSFV E0 gene. The clones were screened by G418 and identified at 5 'and 3' ends. The positive clones were induced by hormone for 24 hours, and the culture medium and cells were collected. The results of RT-PCR and Western blot showed that the transgenic cells could express and secrete CSFV E0 protein. This study laid a foundation for the preparation of transgenic animals using CSFV E0 gene cells as nuclear donor.
【作者单位】： 西北农林科技大学动物医学院;
【基金】：战略性新兴产业重大产品(群)项目(农业领域)(2015KTCQ02-18)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2154904