BHK-21单细胞克隆敏感株筛选及日本脑炎病毒分离

发布时间：2018-08-25 13:39

【摘要】：为筛选出日本脑炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21细胞株,采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株,应用接种BHK-21克隆株方法,从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒,筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变,分离到1株JEV,5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性,但是不产生细胞病变,母代混合细胞没有病变,JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型,鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果,构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混合细胞对分离JEV株敏感,更适合JEV的分离与培养。
[Abstract]:In order to screen Japanese encephalitis virus (JEV) highly sensitive BHK-21 cell lines, single cell clones were isolated from maternal BHK-21 mixed cells by end point dilution method, and the virus was isolated from the grinding fluid of JEV positive mosquito samples by inoculating BHK-21 clone strain. After three passages, a single cell clone strain No. 3 was isolated, and one JEV, 5 monoclonal cell culture showed positive nucleic acid detection, but no cytopathic effect, and the maternal mixed cell had no pathological changes and was negative for nucleic acid detection. Four pairs of primers were designed to identify the genotype of the isolated strain according to the prM and E gene of type 1 JEV, and the isolated strain was identified as type 1 JEV.. Combined with the above results, the constructed BHK-21 single cell clone was more sensitive to the isolation of JEV than the BHK-21 mixed cell, and was more suitable for the isolation and culture of JEV.
【作者单位】： 湖南农业大学动物医学院;
【基金】：湖南省科技厅重点课题(2012NK2001)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2203040