鸡IFN-γ单克隆抗体的制备及其识别区的鉴定

发布时间：2018-09-04 19:18

【摘要】：IFN-γ是鸡体内一种重要的细胞因子,为制备鸡IFN-γ的单克隆抗体,以ch IFN-γ-His融合蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后分离出脾细胞与骨髓瘤细胞系(SP2/0)进行融合,经单克隆培养,筛选得到4株能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2A10、2B10、4D10和4F9。应用间接ELISA方法鉴定4株单抗的重链类型分别为IgG2a、IgG1、IgG1和IgG2b。通过间接ELISA方法测定4株单抗的亲和力解离常数(Kd)分别为1.06×10~(-10)、7.35×10`(-10)、1.10×10~(-10)和9.34×10~(-10),表明4株单抗均为高亲和力抗体。将ch IFN-γ的C端、N端同时进行表达,应用Western-blot方法鉴定4株单抗的抗原识别表位分别为chIFN-γ的47-100位氨基酸,101-145位氨基酸和1-46位氨基酸。应用Western-blot方法鉴定4株单抗的特异性,4株单抗均能识别原核表达的重组蛋白chIFN-γ,而不识别鸡ch IL-2、ch IL-4、ch IL-10蛋白,表明4株单抗特异性良好。原核表达chIFN-γ蛋白制备单克隆抗体效果良好,为进一步研究chIFN-γ的功能奠定了基础。
[Abstract]:IFN- 纬 is an important cytokine in chicken. In order to prepare monoclonal antibody to chicken IFN- 纬, BALB/c mice were immunized with ch IFN- 纬 -His fusion protein. Spleen cells were isolated and fused with myeloma cell line (SP2/0) after three times of immunization. Four hybridoma cell lines with stable secretion of monoclonal antibodies were selected and named 2A10B10D10 and 4F9, respectively. Identification of heavy chain types of four McAbs by indirect ELISA method: IgG2a,IgG1,IgG1 and IgG2b. The affinity dissociation constant (Kd) of the four McAbs determined by indirect ELISA was 1.06 脳 10 ~ (-10), 7.35 脳 10 ~ (-10) and 9.34 脳 10 ~ (-10), respectively. The results showed that the four McAbs were high affinity antibodies. The C-terminal N-terminal of ch IFN- 纬 was expressed at the same time. The antigen-recognition epitopes of four McAbs were identified as 101-145 amino acids and 1-46 amino acids of chIFN- 纬, respectively. Western-blot method was used to identify the specific McAbs of the four strains. All the McAbs could recognize the prokaryotic expressed recombinant protein chIFN- 纬, but not the chicken ch IL-2,ch IL-4,ch IL-10 protein. The results showed that the four McAbs had good specificity. The prokaryotic expression of chIFN- 纬 protein had a good effect on the preparation of monoclonal antibody, which laid a foundation for the further study of the function of chIFN- 纬.
【作者单位】： 中国农业大学动物医学院农业生物技术国家重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31272543;31430085) 现代农业产业技术体系建设专项(NYCYTX-41)
【分类号】：S831

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本文编号：2223104