TGF-β1、PDGF-B在TLR4信号通路中作用的研究

发布时间：2018-09-05 07:05

【摘要】：前期研究表明TGF-β1、PDGF-B基因在LPS介导的小鼠乳腺上皮细胞(MECs)差异显著的上调,且小鼠MECs在LPS刺激下通过TLR4信号通路引起细胞分泌前炎症细胞因子而调节免疫和炎症,为了研究TGF-β1、PDGF-B基因在TLR4信号通路的作用,本研究采用siRNA转染技术对TGF-β1和PDGF-B基因进行沉默,用实时荧光定量RT-PCR方法筛选最佳转染条件,继续采用实时荧光定量RT-PCR方法分别检测它们沉默后LPS介导其下游信号Smad3和PI3K mRNA表达量,用ELISA方法检测其下游信号Smad3和PI3K蛋白含量,ELISA方法检测LPS介导细胞分泌前炎症细胞因子IL-6和TNF-α的量。实验结果显示:选用TGF-β1-mus-1212、PDGF-B-mus-886 siRNA转染片段50 nM、30 nM、20 nM浓度组都能极显著抑制TGF-β1和PDGF-B的mRNA表达(P0.01),其中,TGF-β1-mus-1212片段、PDGF-B-mus-886片段的50 nM浓度下各转染抑制率分别最高。TGF-β1沉默后,LPS刺激下其下游信号Smad3mRNA表达量和细胞分泌量与LPS对照组相比呈显著性降低(P0.05),细胞分泌TNF-α的量比LPS对照组显著降低(P0.05),分泌IL-6的量各组无变化(P0.05)。PDGF-B沉默后,LPS刺激下其下游PI3K的mRNA表达量与LPS对照组相比呈显著性降低(P0.05),PI3K蛋白含量与LPS对照组相比有所降低,但差异不显著(P0.05),细胞分泌IL-6的量与LPS对照组相比呈显著性降低(P0.05),分泌TNF-α的量各组无变化(P0.05)。结果提示:采用siRNA转染技术成功对TGF-β1、PDGF-B基因沉默;小鼠MECs中TGF-β1与Smad3有直接关系,TGF-β1能引起LPS介导的其下游信号Smad3表达和前炎症因子的分泌,它可能是小鼠MECs上TLR4信号通路中的关键基因;PDGF-B与PI3K有一定关系,PDGF-B可引起LPS介导的其下游信号PI3K表达和前炎症因子的分泌,但PI3K激活可能还有其他途径,PDGF-B可能是小鼠MECs上TLR4信号通路中的关键基因。因此,TGF-β1和PDGF-B基因可以作为靶基因进行更加深入的研究,能为乳腺炎症、肿瘤等乳腺相关疾病的治疗提供新的思路及实验数据,为新药的开发和应用提供理论依据。
[Abstract]:Previous studies showed that TGF- 尾 1 PDGF-B gene was significantly up-regulated in (MECs) of mouse mammary epithelial cells mediated by LPS, and that mouse MECs stimulated by LPS induced the secretion of preinflammatory cytokines through TLR4 signaling pathway to regulate immunity and inflammation. In order to study the role of TGF- 尾 1 and PDGF-B gene in TLR4 signaling pathway, siRNA transfection technique was used to silence TGF- 尾 1 and PDGF-B genes, and real-time fluorescence quantitative RT-PCR was used to screen the optimal transfection conditions. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR was used to detect the expression of Smad3 and PI3K mRNA in their downstream signal mediated by LPS after their silencing, respectively. The content of Smad3 and PI3K protein in downstream signal was detected by ELISA method and the quantity of IL-6 and TNF- 伪 secreted by LPS mediated cells was detected by Elisa. The results showed that TGF- 尾 1-mus-1212 PDGF-B-mus-886 siRNA transfection fragment 50 nM,30 nM,20 nM could significantly inhibit the mRNA expression of TGF- 尾 1 and PDGF-B (P0.01). The inhibitory rates of 50 nM on the transfection of TGF- 尾 1-mus-1212 PDGF-B-mus-886 fragment were the highest under the stimulation of TGF- 尾 1 and PDGF-B after the silencing of TGF- 尾 1. TGF- 尾 1-mus-1212 fragment and PDGF-B-mus-886 fragment of PDGF-B-mus-886, respectively. The expression of downstream signal Smad3mRNA and cell secretion were significantly lower than those of LPS control group (P0.05), the amount of TNF- 伪 secreted by cells was significantly lower than that of LPS control group (P0.05), and the amount of IL-6 secreted in each group had no change (P0.05). The mRNA table of downstream PI3K stimulated by PDGF-B silencing was significantly lower than that of LPS control group (P0.05). The content of PI3K in LPS group was significantly lower than that in control group (P0.05), and the protein content of PI3K was lower than that of LPS control group. But the difference was not significant (P0.05), the amount of IL-6 secreted by cells was significantly lower than that of LPS control group (P0.05), the amount of secreting TNF- 伪 did not change in each group (P0.05). The results suggested that TGF- 尾 1 PDGF-B gene was silenced successfully by siRNA transfection technique, and that TGF- 尾 1 in mouse MECs was directly related to Smad3, and TGF- 尾 1 could induce LPS mediated Smad3 expression and proinflammatory factor secretion. It may be that PDGF-B is a key gene in the TLR4 signaling pathway of mouse MECs. PDGF-B may induce the expression of PI3K and the secretion of proinflammatory factors mediated by LPS. However, there may be other pathways to PI3K activation. PDGF-B may be a key gene in the TLR4 signaling pathway of mouse MECs. Therefore, TGF- 尾 1 and PDGF-B genes can be used as target genes for further research, which can provide new ideas and experimental data for the treatment of breast inflammation, tumor and other mammary gland related diseases, and provide theoretical basis for the development and application of new drugs.
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.3

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 白艳;刘云章;;受体酪氨酸激酶Ror在Wnt信号通路中的功能研究进展[J];河北农业科学;2012年07期

2 韩琳;冯新港;;Wnt信号通路及其在动物生长发育过程中的作用[J];中国兽医寄生虫病;2008年03期

3 宋舟;张立艳;董海兵;白换力;陈伟;吴帅成;伊鹏霏;付本懂;申海清;韦旭斌;;JAK-STAT信号通路研究进展[J];中国畜牧兽医;2012年06期

4 王少兵;陶显娣;杨靖东;季慕寅;徐银学;;Wnt信号通路在哺乳动物卵泡发育中的作用[J];芜湖职业技术学院学报;2012年04期

5 李聪;马凯丽;刘增力;王志钢;;IGFs及其信号通路研究进展[J];生物技术通报;2013年09期

6 刘荣雕;阮灵伟;;PI3K-Akt信号通路与病毒感染[J];生物技术通报;2013年06期

7 李桂兰;杨洪双;张丽;;SWH信号通路生长控制作用研究进展[J];安徽农业科学;2010年07期

8 赵静;张春雷;房兴堂;陈宏;;WNT信号通路的研究进展[J];中国牛业科学;2012年01期

9 李鹏;夏平安;宋咏梅;赵桂苹;;鸡Toll样受体4信号通路及在鸡沙门菌抗病研究中的应用进展[J];中国家禽;2009年15期

10 滕英娟;孙春光;;PI3K/Akt及MAPK/Erk1/2信号通路在病毒感染中的作用[J];郑州牧业工程高等专科学校学报;2012年01期

相关会议论文 前10条

1 程华;王文;;经典Wnt信号通路抑制剂[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛论文汇编[C];2011年

2 蒋莹;程华;张丽;艾厚喜;王文;;经典Wnt信号通路抑制剂[A];第一届全国麻醉药理专业委员会第二次学术会议论文集[C];2011年

3 蒋莹;程华;张丽;艾厚喜;王文;;经典Wnt信号通路抑制剂[A];中国成人医药教育论坛（4）[C];2011年

4 蒋莹;程华;张丽;艾厚喜;王文;;经典Wnt信号通路抑制剂[A];中国药理学会补益药药理专业委员会成立大会暨人参及补益药学术研讨会会议论文集[C];2011年

5 李艳菲;艾厚喜;孙芳玲;张丽;蒋莹;王文;;Wnt信号通路研究新进展[A];2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集[C];2013年

6 李艳菲;艾厚喜;孙芳玲;张丽;蒋莹;王文;;Wnt信号通路研究新进展[A];2013年全国老年性痴呆与相关疾病学术会议论文汇编[C];2013年

7 李艳菲;艾厚喜;孙芳玲;张丽;蒋莹;王文;;Wnt信号通路研究新进展[A];第三届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会论文集[C];2013年

8 季宇彬;胡哲清;邹翔;;MAPK信号通路及其研究进展[A];转化医学研讨会论文集[C];2010年

9 程华;孙芳玲;艾厚喜;张丽;蒋莹;王文;;Wnt信号通路与血管发生[A];全国第三次麻醉药理学术会议论文集[C];2012年

10 李林;;利用小分子探针研究经典Wnt信号通路的信号转导机制[A];中国生物化学与分子生物学会第十一次会员代表大会暨2014年全国学术会议论文集——专题报告七[C];2014年

相关重要报纸文章 前6条

1 刘海英;美发现两种细胞信号通路互动机制[N];科技日报;2009年

2 记者 刘海英;英发现细胞信号通路新“刹车”蛋白[N];科技日报;2012年

3 衣晓峰　陈英云 记者 李丽云;结肠癌发生中新的信号通路找到[N];科技日报;2009年

4 记者 许琦敏;减肥信号受控于脑中“通讯员”[N];文汇报;2008年

5 记者 刘海英;一种蛋白决定人的抗压能力[N];科技日报;2011年

6 通讯员 乔蕤琳 记者 衣晓峰 聂松义;癌症中小分子和微小核苷酸有关联[N];健康报;2012年

相关博士学位论文 前10条

1 王森;乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4信号通路的机制研究[D];复旦大学;2014年

2 尚果果;NRF2抗氧化应激信号通路的活化在糖尿病肾病中的保护作用及其机制研究[D];复旦大学;2014年

3 孙鼎琪;Akt信号通路在膀胱肿瘤的进展及化疗敏感性的实验研究[D];山东大学;2015年

4 白秀峰;新基因Gsdma3对小鼠毛囊周期及Wnt/β-catenin信号通路作用的研究[D];第三军医大学;2015年

5 张俊波;PI3K/Akt信号通路调控胞内布鲁氏菌16M存活的分子机制研究[D];石河子大学;2014年

6 成旭东;黄芪活性物质筛选及基于PKC-ERK信号通路抑制肺癌的作用机理研究[D];南京中医药大学;2015年

7 路康;STAT3信号通路介导CLL和MCL发生组蛋白去乙酰化酶抑制剂耐药的机制研究[D];山东大学;2015年

8 赵睿;Wnt信号通路在臂丛神经根性撕脱伤诱发的神经病理性痛中的作用机制研究[D];第四军医大学;2015年

9 刘海燕;Sonic hedgehog信号通路对正常角质形成细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制[D];第四军医大学;2015年

10 祁义军;胃肠道间质瘤中Shh信号通路作用的实验研究[D];安徽医科大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 李玉娟;Hedgehog信号通路在大鼠急性胰腺炎中的作用及其对TNF-α、IL-10的影响[D];河北医科大学;2015年

2 赵玲玲;FLCN与PAT1相互作用调控mTORC1信号通路的机理研究[D];西北农林科技大学;2015年

3 程志芬;Hedgehog信号通路相关因子在TCA舌癌细胞株中的表达及其意义[D];延边大学;2013年

4 陈丹丹;Neurexin通过Gbb信号通路调控果蝇神经肌肉接头突触生长[D];东南大学;2015年

5 马会彦;胃癌中HSulf-1与Hedgehog信号通路的关系研究[D];浙江理工大学;2011年

6 胡磊;Cdc25A抑制RIG-Ⅰ介导的信号通路机制研究[D];安徽大学;2014年

7 杨鑫娜;NOTCH信号通路在慢性阻塞性肺疾病免疫失衡中的作用及机制研究[D];兰州大学;2015年

8 刘宁;酰基四氢-β-咔啉类化合物通过靶向USP15进而调控TGFβ信号通路活性的结构优化与探究[D];华东师范大学;2015年

9 杨明;TLR3/TRIF信号通路在帕金森病模型炎症反应中的作用及机制研究[D];成都医学院;2016年

10 周杰;黑米花青素通过FAK信号通路抗HER-2阳性乳腺癌转移及EMT效应的体外研究[D];成都医学院;2016年

，

本文编号：2223545