鸡传染性支气管炎病毒强毒株和弱毒疫苗株的免疫磁珠-多重RT-PCR鉴别方法的建立

发布时间：2018-09-06 06:27

【摘要】：利用鸡传染性支气管炎病毒(IBV)多克隆抗体构建的免疫磁珠富集IBV,对Gen Bank中896株IBV S1基因序列及其多变区进行分析,根据IBV强毒株和弱毒疫苗株序列差异设计引物,建立了一种基于免疫磁珠富集IBV后检测S1基因多变区的多重RT-PCR方法。结果表明:该方法能扩增出强毒株约710 bp的通用片段和约350 bp的特异片段,弱毒疫苗株能扩增出约710 bp的通用片段和约210 bp的特异片段,能鉴别出强毒株和弱毒疫苗株。免疫磁珠富集IBV后比不富集病毒用RT-PCR方法检测敏感性提高100倍。该方法为IBV检测提供了新的技术支持。
[Abstract]:The sequence and variable region of IBV S1 gene of 896 strains of avian infectious bronchitis virus (Gen Bank) were analyzed by IBV, enriched with immunomagnetic beads constructed by polyclonal antibody against avian infectious bronchitis virus (IBV). Primers were designed according to the sequence difference between IBV virulent strain and attenuated vaccine strain. A multiplex RT-PCR method based on immunomagnetic bead enrichment (IBV) was developed to detect the variable region of S1 gene. The results showed that the common fragment of virulent strain about 710 bp and the specific fragment of 350 bp could be amplified by this method. The common fragment of about 710 bp and the specific fragment of about 210 bp could be amplified from attenuated vaccine strain, and the virulent strain and attenuated vaccine strain could be identified. The sensitivity of IBV enriched by immunomagnetic beads was 100 times higher than that of non-enriched virus by RT-PCR. This method provides new technical support for IBV detection.
【作者单位】： 四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室 "985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台 生物资源与生态环境教育部重点实验室;
【基金】：现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-41-K09) 四川省科技支撑计划项目(2014NZ0002) 国家自然科学基金项目(31372442)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2225531