巨型艾美耳球虫配子体蛋白EmGAM56的原核表达及其抗原性鉴定

发布时间：2018-09-10 18:20

【摘要】：本研究将巨型艾美耳球虫Emgam56基因去除信号肽后的ORF序列连接至pET-28a(+)载体,构建表达载体pET-28-Emgam56,转化表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达;分析表达产物的可溶性和重组蛋白的分子相对质量,并进一步鉴定重组配子体蛋白rEmGAM56的抗原性。SDS-PAGE分析表明,表达载体能表达56000左右蛋白质,主要以可溶性蛋白的形式存在;Western blot检测表明,rEmGAM56蛋白能被鼠抗rEmGam56多克隆抗体和巨型艾美耳球虫感染鸡的康复血清特异性识别,显示重组蛋白具有良好的抗原性。本研究结果为研制重组配子体抗原亚单位疫苗奠定了基础。
[Abstract]:In this study, the ORF sequence of Emgam56 gene was ligated to pET-28a () vector, and the expression vector pET-28-Emgam56, was transformed into E. coli BL21 (DE3), which was induced by IPTG. The soluble expression product and the molecular weight of the recombinant protein were analyzed, and the antigenicity of recombinant gametophyte protein rEmGAM56 was further identified. SDS-PAGE analysis showed that the expression vector could express about 56000 proteins. The results of Western blot analysis showed that rEmGAM56 protein could be specifically recognized by the rehabilitation serum of mice against rEmGam56 polyclonal antibody and Eimeria megamelliae infected chicken, which showed that the recombinant protein had good antigenicity. The results laid a foundation for the development of recombinant gametophyte antigen subunit vaccine.
【作者单位】： 扬州大学兽医学院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【基金】：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20123250110002) 江苏省属高校自然科学基金重大资助项目(11KJA230002) 江苏省高校优势学科建设工程资助项目
【分类号】：S852.7

【参考文献】

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1 彭昊;许金俊;刘丹丹;李建梅;陶建平;;巨型艾美球虫重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82的免疫保护效果研究[J];中国预防兽医学报;2011年09期

2 彭昊;陶建平;许金俊;刘丹丹;李建梅;任春芝;;巨型艾美球虫配子体gam82基因的克隆表达与免疫原性分析[J];中国兽医学报;2010年09期

3 许金俊;姜慧婕;陶建平;彭昊;张艳;孙文瑶;;巨型艾美球虫gam56基因的截短原核表达及其产物的免疫保护效果[J];中国预防兽医学报;2009年11期

4 张晓燕;丁隽;刘群;;巨型艾美耳球虫配子体GAM56基因的克隆与表达[J];中国兽医杂志;2007年11期

【共引文献】

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1 宿世杰;候照峰;许金俊;陶建平;;巨型艾美耳球虫配子体蛋白EmGAM56的原核表达及其抗原性鉴定[J];中国兽医学报;2017年05期

2 康桂英;;鸡球虫病的免疫预防研究进展[J];中国畜牧兽医文摘;2015年11期

3 刘丹丹;曹李琴;朱玉兰;许金俊;吴力力;金文杰;陶建平;;毒害艾美耳球虫配子体gam22基因的克隆与序列分析[J];畜牧与兽医;2014年05期

4 彭昊;许金俊;刘丹丹;李建梅;陶建平;;巨型艾美耳球虫gam82基因核酸疫苗的构建与免疫原性分析[J];中国兽医杂志;2011年09期

5 许金俊;姜慧婕;陶建平;彭昊;张艳;孙文瑶;;巨型艾美球虫gam56基因的截短原核表达及其产物的免疫保护效果[J];中国预防兽医学报;2009年11期

【二级参考文献】

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1 张晓燕;丁隽;刘群;;巨型艾美耳球虫配子体GAM56基因的克隆与表达[J];中国兽医杂志;2007年11期

2 许金俊;陶建平;彭金彪;孙文瑶;姜慧婕;彭浩;张艳;;不同佐剂和免疫途径对柔嫩艾美耳球虫SO7抗原免疫保护效果的影响[J];中国预防兽医学报;2007年09期

3 陶建平;沈永林;李文超;辛玲;戴亚斌;;11株巨型艾美耳球虫的免疫原性分析[J];南京农业大学学报;2005年04期

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3 廖世鹏,罗润友;驱球散治疗鸡巨型艾美耳球虫的效果观察[J];四川畜牧兽医;1994年03期

4 P.C.Allen ,王米;日粮维生素E水平对感染巨型艾美耳球虫肉仔鸡的影响[J];中国兽医寄生虫病;2003年03期

5 周宏超;林青;宋军科;于三科;;巨型艾美耳球虫杨凌分离株的致病性[J];畜牧与兽医;2010年01期

6 董辉;郭涛;赵其平;韩红玉;姜连连;朱顺海;黄兵;程军;马卫娇;;巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究[J];中国动物传染病学报;2010年05期

7 王江清;王方正;;紫外线诱导巨型艾美耳球虫的早熟株选育[J];中国动物传染病学报;2013年06期

8 黄兵，史天卫，吴薛忠，，赵其平，陈兆国;巨型艾美耳球虫纯种鉴定和致病性研究[J];中国兽医寄生虫病;1995年04期

9 丁熙成;姜悦平;沈思军;徐素红;;雏鸡感染巨型艾美耳球虫后一些生理生化参数变化[J];中国农业大学学报;1998年S2期

10 李凯年;;芦荟可用于防治肉鸡巨型艾美耳球虫感染[J];中国动物保健;2010年11期

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2 董辉;黄兵;林矫矫;韩红玉;赵其平;姜连连;郭涛;李洋;平宪卿;;巨型艾美耳球虫早熟株生物学特征及其相关基因研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年

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7 宿世杰;巨型艾美耳球虫重组配子体蛋白的免疫保护效果研究[D];扬州大学;2014年

8 杨楠;火鸡隐孢子虫和巨型艾美耳球虫生物学特性及对雏鸡致病性研究[D];河南农业大学;2011年

本文编号：2235249