食淀粉乳杆菌调节小鼠肠道GM3在抗RV感染中的作用

发布时间：2018-10-11 18:56

【摘要】：轮状病毒(Rotavirus,RV)属于呼肠孤病毒科,轮状病毒属,是引起幼畜病毒性肠炎、腹泻的的主要病原之一,对我国养猪业危害巨大,神经节苷酯GM3是其主要受体之一。为了探讨食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)在抗猪轮状病毒(Procine Rotavirus,PRV)作用中GM3的调节机制,本研究分别完成了食淀粉乳杆菌体外抗RV能力分析;食淀粉乳杆菌体内对RV感染小鼠乳鼠的相关效应和乳鼠空肠神经节苷脂GM3变化规律等两方面研究,旨在阐明食淀粉乳杆菌抗RV部分机制。本研究分为体外和动物体内两个部分。体外实验以IPEC-J2细胞为细胞平台、MTT法为检验方法分析食淀粉乳杆菌体外抗RV能力;体内实验选择中国昆明鼠乳鼠作为实验动物,检测食淀粉乳杆菌体内对RV感染小鼠乳鼠的相关效应,进一步检测了乳鼠空肠神经节苷脂GM3变化规律和上述效应相关性。一、体外试验部分。主要包括食淀粉乳杆菌上清液抗RV能力稳定性研究和益生菌共培养上清液抗RV能力测定两个方面:1.食淀粉乳杆菌上清液抗RV能力稳定性研究:连续将食淀粉乳杆菌传代25次,每隔3代测定其上清抗RV能力,测定结果显示:各代食淀粉乳杆菌对RV抑制率差异不显著,表明该株食淀粉乳杆菌菌株抗RV能力较为稳定,具有较为良好的传代稳定性。2.益生菌共培养上清液抗RV能力测定:选取食淀粉乳杆菌和抗RV能力不等的4株屎肠球菌为实验材料,探究该株食淀粉乳杆菌与不同株屎肠球菌共培养后,共培养上清液抗RV能力与单独食淀粉上清液及单独屎肠球菌上清液抗RV能力间的差异。实验结果显示:z4、z5和z8与食淀粉乳杆菌混合培养后上清液抗RV能力,介于单独食淀粉乳杆菌和单独z4、z5和z8上清液抗RV能力之间,差异不显著(p0.05)。z7和食淀粉乳杆菌共培养上清液对RV抑制率均低于单独屎肠球菌上清及单独食淀粉乳杆菌上清。说明该株食淀粉乳杆菌有良好的共培养稳定性。二、体内实验部分。主要包括食淀粉乳杆菌体内对RV感染小鼠乳鼠的相关效应和食淀粉乳杆菌对乳鼠空肠神经节苷脂GM3作用两方面。试验乳鼠分为4组:正常组、病毒组、先灌胃益生菌后攻毒组-食淀粉组(Gavaged probiotic before inoculation group,BI group)和先攻毒后灌胃益生菌组-治疗组(Gavaged probiotic after inoculation group,AI group),26只每组,共饲喂11天(d),从1d开始BI组每只每天灌胃50μL益生菌活菌液(106cfu/mL),其他组每只每天饲喂等量PBS,病毒组、BI组和AI组4d时每只小鼠饲喂毒力为10-6.28TCID50/mL轮状病毒50μL,AI组在4d时每天灌胃50μL益生菌活菌液(106cfu/mL)。1.食淀粉乳杆菌体内对RV感染小鼠乳鼠的相关效应:感染RV乳鼠的体重增长率升降、粪样病毒量多少和空肠黏膜组织学变化。(1)体重增长率测定结果显示:饲喂1d~4d时各组体重增长率差异不显著(p0.05);饲喂4d~11d时正常组体重增长率显著高于其他组别(p0.05);攻毒前后饲喂食淀粉乳杆菌,乳鼠体重增长率仍会出现一定程度的降低;BI组及AI组体重增长率显著高于病毒组(p0.05),BI组和AI组体重增长率差异不显著(p0.05)。(2)粪样病毒量测定结果显示:感染后2d、3d、4d、5d及7d时BI组RV含量均显著低于病毒组(p0.05);AI组在感染后4d时RV含量显著低于病毒组(p0.05),其他时间点差异不显著。(3)空肠黏膜组织学变化结果显示:病毒组小肠上皮细胞出现轻微空泡变性,小肠绒毛内部组织缺失较为严重,绒毛上皮细胞形态发生显著变化,BI组及AI相对于病毒组,相关症状明显减轻;BI组空肠绒毛长度在攻毒后1d和3d时显著高于病毒组(p0.05),和正常组差异不显著(p0.05);AI组空肠绒毛长度大于病毒组,但差异不显著(p0.05);攻毒后5d、7d时各组绒毛长度差异不显著(p0.05)。2.食淀粉乳杆菌对乳鼠空肠神经节苷脂GM3影响实验分为两个方面:乳鼠空肠组织GM3定量ELISA检测和乳鼠空肠组织GM3合成酶m RNA检测。(1)乳鼠空肠组织GM3定量ELISA检测结果显示,攻毒前:2d~4d时BI组及正常组差异不显著(P0.05),攻毒后:5d、9d及11d时BI组神经节苷酯GM3含量显著高于正常组及病毒组(P0.05);9d时病毒组神经节苷酯GM3含量显著高于正常组(P0.05);AI在5d和11d时显著高于病毒组(p0.05),AI组在9d和11d时显著低于BI组。(2)乳鼠空肠组织GM3合成酶Mus St3gal5mRNA结果显示:攻毒前,BI组与正常组在2d、3d、4d时均差异不显著(p0.05),攻毒后,5d、9d时病毒组水平显著低于正常组(p0.05);7d、9d及11d时BI组水平显著低于病毒组(p0.05);5d、7d时AI组水平略低于病毒组(p0.05)。(3)乳鼠空肠组织GM3合成酶Mus UGCGm RNA结果显示:攻毒前,3d时BI组与正常组差异不显著(p0.05),攻毒后:7d、9d时病毒组水平均显著低于正常组(p0.05);7d、9d、10d时BI组水平显著低于正常组及病毒组(p0.05),11d时AI组水平显著低于病毒组(p0.05)。综上所述连续25代培养以及与4株屎肠球菌共培养后,该株食淀粉乳杆菌其抗RV能力仍然保持相对的稳定性。该株食淀粉乳杆菌接种RV感染前后的乳鼠,其小肠上皮细胞中RV受体神经节苷酯GM3,在RV感染前与正常组一致,在RV感染后明显升高;显著减少乳鼠粪便中RV含量、减轻RV对乳鼠小肠绒毛损伤、抑制小肠隐窝增生、改善体重增长率的降低。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S855.3

【参考文献】

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本文编号：2264890