口服禽流感重组枯草芽孢杆菌对鸡免疫和生长的影响

发布时间：2018-10-22 15:18

【摘要】：禽流感病毒主要通过消化道和呼吸道黏膜感染并传播,而口服免疫是一种有效的黏膜免疫方法,它可在黏膜部位直接切断禽流感病毒的传播途径,从而控制禽流感的发生。目前发现的禽流感重组活载体疫苗,因其安全性、有效性,已经成为未来禽流感疫苗研发的主要方向之一。本试验中,以枯草芽孢杆菌WB800为载体,以H5N1血凝素HA为目的基因,成功构建了重组枯草芽孢杆菌WB800-HA和WB800-HA-SS,并通过SDS-PAGE和Western blot证实HA基因可在重组枯草芽孢杆菌中正确表达。然后在体内试验中,又进一步探讨了重组枯草芽孢杆菌对鸡口服免疫效力和生长状况的影响,为高致病性禽流感H5N,疫苗的研发和应用提供新思路。将5日龄健康海蓝蛋鸡随机分为6组,每组7只。10日龄首免,13日龄二免,17日龄三免。第1组口服PBS,作为空白对照组;第2组口服免疫灭活H5N1疫苗;第3组皮下注射灭活H5N1油乳佐剂疫苗,第2、3组作为阳性对照组;第4组口服免疫正常枯草芽抱杆菌WB800(0.3 mL1010cfu/mL菌液/只),作为阴性对照组;第5、6组分别口服免疫表达H5N1血凝素蛋白HA的重组枯草芽孢杆菌WB800-HA及WB800-HA-SS(0.3 mL 1010cfu/mL菌液/只),作为试验组。通过统计首免后鸡粪便中的枯草芽孢杆菌数量,分析其在鸡肠道中的定植情况;其次,应用间接ELISA和HI试验检测禽流感重组枯草芽孢杆菌疫苗口服免疫对局部黏膜免疫和全身免疫水平的影响;最后,通过记录各周鸡的体重并应用HE染色观察鸡肠黏膜形态学的变化,探讨口服禽流感重组枯草芽孢杆菌对鸡生长状况以及PP结面积的影响。试验结果如下:1、重组枯草芽孢杆菌在鸡肠道中的定植情况首免后无菌采集各个时间点鸡的粪便,通过形态学鉴定和16SrDNA鉴定,统计各个时间点的枯草芽孢杆菌的菌落数,结果发现:首免后2h开始,绝大多数枯草芽孢杆菌大量排出体外,随后体内残余的枯草芽孢杆菌至48 h还能够检测到。2、口服禽流感重组枯草芽抱杆菌疫苗诱导局部黏膜体液免疫水平的检测应用间接ELISA的方法分别检测首免后3、5、7周鸡口腔涮洗液和第8周鸡肠道和气管涮洗液中特异性S IgA水平。结果发现WB800-HA和WB800-HA-SS疫苗组口腔和肠道涮洗液中特异性S IgA水平与空白对照组有极显著差异(P0.01),且WB800-HA-SS组气管涮洗液中特异性S IgA水平,显著高于空白对照组(0.01P0.05)。结果表明这两种禽流感重组枯草芽孢杆菌疫苗均可有效地增强鸡消化道和呼吸道局部黏膜体液免疫水平,尤其对消化道局部黏膜体液免疫的增强作用更为显著。3、口服禽流感重组枯草芽孢杆菌疫苗诱导全身性免疫水平的检测血凝抑制(HI)试验结果显示:首免后第1周,母源抗体水平比较高。随着母源抗体水平的降低,首免后第4周开始,正常枯草芽抱杆菌组和两种重组枯草芽孢杆菌组血清中特异性HI抗体效价整体上比较低。检测首免后3、5、7周血清中特异性IgG结果显示:重组枯草芽孢杆菌WB800-HA与WB800-HA-SS血清特异性IgG抗体水平均显著高于空白对照组(0.01P0.05),但远远低于灭活疫苗组,其中WB800-HA-SS组稍高于WB800-HA组。综合以上试验结果,初步判定:这两种禽流感重组枯草芽孢杆菌疫苗均可在一定程度上增强机体的全身性免疫应答。4、口服禽流感重组枯草芽抱杆菌疫苗对鸡生长状况的影响记录各周鸡体重并进行统计学分析发现:首免后的前4周,各组鸡的体重相当;从首免后第5周开始各组鸡的体重明显高于空白对照组,其中正常枯草芽孢杆菌及两种重组枯草芽孢杆菌组鸡的体重极显著高于空白对照组(P0.01);两种重组枯草芽孢杆菌组的鸡体重高于正常枯草芽孢杆菌,但无统计学差异。HE染色观察各组鸡小肠绒毛的形态结构,结果表明:小肠绒毛高度变化与体重变化趋势一致,即重组枯草芽孢杆菌相比于空白对照组,小肠绒毛高度极显著增加(P0.01),且WB800-HA-SS组小肠绒毛最长,极显著高于其它各组(P0.01)。两种重组枯草芽孢菌疫苗,尤其是WB800-HA-SS,可显著促进回肠PP结的分化、发育,增大PP结的面积(P0.01)。以上结果表明这两种重组枯草芽孢杆菌可极显著改善鸡的生长性能,并显著增大回肠PP结面积,增强机体免疫应答。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.31

【参考文献】