新孢子虫与弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒的构建及免疫应答分析

发布时间：2018-11-08 16:20

【摘要】：为构建新孢子虫和弓形虫AMA1基因重组腺病毒,并分析其免疫原性,本试验根据新孢子虫和弓形虫AMA1基因序列的开放阅读框,设计新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因通用引物,构建重组克隆质粒pMD18T-NcAMA1、pMD18T-TgAMA1及重组腺病毒穿梭质粒ADV4-Nc/TgAMA1,将ADV4-Nc/TgAMA1和骨架质粒pacAd5线性化后共转染293T细胞,包装Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒,测定病毒滴度后,收集病毒液接种BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体水平。结果显示,Nc/TgAMA1在Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒中获得表达,测定Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒滴度为109 PFU/mL,接种BALB/c小鼠后,Ad5-Nc/TgAMA1接种组IgG抗体水平明显高于pVAX1-Nc/TgAMA1质粒组和PBS对照组。结果表明,构建的Ad5-Nc/TgAMA1重组腺病毒能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。本试验为新孢子虫和弓形虫交叉抗原AMA1基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了基础。
[Abstract]:In order to construct the recombinant adenovirus of AMA1 gene of Neosporidium and Toxoplasma gondii, and analyze its immunogenicity, a universal primer for AMA1 gene of new sporidium and Toxoplasma gondii cross-antigen was designed according to the open reading frame of AMA1 gene sequence of Neosporidium and Toxoplasma gondii. The recombinant clone plasmid pMD18T-NcAMA1,pMD18T-TgAMA1 and the recombinant adenovirus shuttle plasmid ADV4-Nc/TgAMA1, were constructed, the ADV4-Nc/TgAMA1 and the skeleton plasmid pacAd5 were linearized and co-transfected into 293T cells. The recombinant adenovirus was packaged with Ad5-Nc/TgAMA1 and the titer of the recombinant adenovirus was determined. The virus solution was collected and inoculated into BALB/c mice. The serum IgG antibody level was detected by indirect ELISA. The results showed that Nc/TgAMA1 was expressed in Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus. The titer of Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus was determined to be 109 PFU/mL, in BALB/c mice. The level of IgG antibody in Ad5-Nc/TgAMA1 inoculation group was significantly higher than that in pVAX1-Nc/TgAMA1 plasmid group and PBS control group. The results showed that Ad5-Nc/TgAMA1 recombinant adenovirus could induce specific humoral immune response in mice. This study laid a foundation for the preparation of recombinant adenovirus vector vaccine of AMA1 gene of new sporidium and Toxoplasma gondii.
【作者单位】： 延边大学农学院动物医学系;
【基金】：国家自然科学基金(31160501、31360605) 吉林省重点科技攻关项目(20140204078NY) 吉林省教育厅重点项目(吉教科合字[2015]第1号) 吉林省自然科学基金(20160101201JC)
【分类号】：S852.7

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本文编号：2319018