【摘要】：三聚氰胺(Melamine, MA)作为重要的有机化工原料被广泛应用于人们的生产、生活中,三聚氰胺在遇到强酸、强碱胺基被羟基取代发生水解,生成三聚氰酸。三聚氰胺和三聚氰酸联合作用对动物机体毒性增加,主要导致动物肾脏毒性增强。目前,关于该类化合物对免疫系统影响的研究报道很少,Lazarova在2004年报道了由于接触乙烯脲三聚氰胺甲醛和三聚氰胺甲醛发生过敏而感染纺织性皮炎的事件,引起作者关于该类化合物对动物机体免疫系统危害的思考,本论文旨在研究三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对雄性小鼠体液免疫的影响,为完善三聚氰胺与三聚氰酸的免疫毒理学评价资料提供理论依据。试验一三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对攻毒大肠杆菌小鼠抵抗力影响研究方法：将144只雄性KM小鼠随机分为8组,空白对照组、大肠杆菌阳性对照组,三聚氰胺高、中、低剂量组(50mg/kg、10 mg/kg、2mg/kg)、三聚氰胺与三聚氰酸联合高、中、低(25+25 mg/kg、5+5 mg/kg、1+1 mg/kg)剂量组,试验组隔天灌胃15d后,大肠杆菌阳性对照组和试验组腹腔注射大肠杆菌,48 h后检测小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化率、血清溶血素光密度值、小鼠迟发性变态免疫反应等指标。结果表明：①三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对小鼠脾脏指数无显著性变化(P0.05)。②三聚氰胺组和联合攻毒组会使B淋巴细胞转化率降低,混合高剂量组转化率最低(P0.05)。③二者联合攻毒时会使小鼠血清溶血素光密度值降低(P0.01)。④三聚氰胺和与三聚氰酸联合都是随着攻毒剂量的升高T淋巴细胞转化率呈现出下降趋势,但未出现显著性变化(P0.05)。⑤迟发型变态免疫反应发现三聚氰胺高剂量组、联合中、高剂量组会使小鼠足趾部增厚度下降,差异极显著(P0.01)。说明,三聚氰胺及其与三聚氰酸联合能够降低小鼠对大肠杆菌的抵抗力。试验二 三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对雄性小鼠脾脏浆细胞及其相关免疫球蛋白、补体的影响研究研究方法：将42只体重为18-22g的雄性小鼠随机分为7组,空白对照组,三聚氰胺低、中、高剂量组,三聚氰胺与三聚氰酸联合低、中、高剂量组,剂量同试验一,流式细胞术检测小鼠脾脏浆细胞细胞表面MarkerCD138+含量变化,western blot检测小鼠脾脏Blimp-1蛋白表达量,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清抗体IgG、sIgA和补体C3。结果表明：①三聚氰胺单独和联合攻毒均可以导致Blimp-1蛋白表达下降,而且随着攻毒浓度的升高呈递减趋势,联合攻毒组浆细胞MarkerCD138+含量极显著降低(P0.01),说明该类化合物剂能够使能够通过降低小鼠脾脏Blimp-1调控蛋白来降低脾脏浆细胞表面Marker CD138+蛋白,在一定程度上干扰浆细胞的活性。②低剂量的三聚氰胺会使IgG得含量降低(P0.05),三聚氰胺与三聚氰酸联合中剂量也会使sIgA含量降低(P0.05)。③联合攻毒作用下,小鼠血清补体C3含量降低,其中,中剂量组差异显著(P0.05),高剂量组差异极显著(P0.01)。说明该类化合物能够影响机体的体液免疫水平。试验三三聚氰胺及其与三聚氰酸对雄性小鼠Tfh细胞和Th2细胞亚群相关细胞因子的影响研究方法：小鼠分组及处理同试验二,流式细胞术检测小鼠脾脏Tfh细胞表面Marker CD4+CXCR5+含量,酶联免疫吸附试验检测小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-21的含量,western blot检测小鼠脾脏GATA-3蛋白表达量,qRT PCR检测GATA-3 mRNA基因表达水平。结果表明：①三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对小鼠Tfh脾脏细胞表面MarkerCD4+CXCR5+含量变化无影响(P0.05),联合高剂量组会使小鼠血清中的IL-21蛋白含量极显著下降(P0.01)。②小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10变化显示,二者联合会使IL-4含量降低(P0.05或P0.01),二者联合也会使IL-4含量降低,差异极显著(P0.01)；三聚氰胺单独与联合攻毒均能使小鼠血清中的IL-6含量降低,混合攻毒下降极显著(P0.01)；同时,各攻毒组都能使IL-10含量极显著下降(P0.01)。③GATA-3蛋白和GATA-3 mRNA表达水平显示,联合攻毒时随着攻毒剂量的升高,GATA-3蛋白表达量逐渐降低,当攻毒剂量达到25+25 mg/kg时,GATA-3蛋白表达量最低,差异显著。(P0.05)；各攻毒组GATA-3 mRNA的表达水平虽与对照组无显著差异(P0.05),但也均有所降低,说明三聚氰胺及其与三聚氰酸联合高剂量组可能会通过抑制Gata3 mRNA基因表达来降低Gata-3蛋白的生成,提示动物机体内Th2型细胞受到影响,从而干扰Th2细胞合成分泌相关细胞因子,从而对体液免疫产生抑制作用。
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【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S859.8
【参考文献】
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