猪源益生性乳酸菌分离筛选及其在发酵饲料中的应用研究

发布时间：2018-12-07 08:15

【摘要】：发酵饲料主要是是利用乳酸菌等微生物的自身特性,在厌氧条件下发酵,产生大量乳酸等有机酸,降低饲料的pH值,从而增加乳酸菌数量,减少饲料中的有害菌。这类发酵饲料在生猪养殖上显示出了良好的发展的潜力。为获取对猪发酵饲料具有应用价值的乳酸菌菌株,我们从猪肠道分离到141株乳酸菌,通过对菌株产酸性能的初筛,筛选出10株具有制作发酵饲料潜力的乳酸菌菌株;然后对这些菌株的抗逆性及益生性进行了探究,以期筛选出既具有较快发酵速度,又具有益生性能和抗逆性能的乳酸菌;在此基础上,应用这些乳酸菌进行发酵饲料制作,并对所获发酵饲料的特性进行研究,论文分三部分进行。1猪源乳酸菌的分离筛选以及鉴定本试验拟分离筛选产酸能力强的猪源乳酸菌株,研究其发酵产乳酸能力。试验分别采集仔猪肠道食糜、粘膜及猪粪便,采用常规分离手段分离获到141株乳酸菌株。通过生化鉴定、形态学观察及菌株的产酸能力测定,最终筛选到产乳酸速度快、产乳酸量高以及终末pH值较低的10株乳酸菌。16SrDNA序列分析表明,上述10株菌分别为唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)和粪肠球菌(EnterococcusFaecalis)。结果表明,猪源乳酸菌的菌株种类多样,并且乳酸菌的产酸能力与发酵速度也不一致,部分菌株具有较快的发酵速度与产乳酸能力。2猪源乳酸菌的抗逆性及益生性研究本研究旨在对猪肠道中分离到的乳酸菌的抗逆性和益生性进行研究,拟为获取可用于发酵饲料生产接种菌奠定基础。采用体外法,对试验一筛选得到的10株乳酸菌进行耐酸、耐胆盐、抑菌、温度敏感性和耐抗生素试验检测。结果显示,10株乳酸菌中,编号为L71和L104的乳酸菌株可耐受pH 2.5环境,暗示其对胃酸环境有一定的耐受性;L33、L35、L37和L104菌株可能耐受猪肠道的胆盐环境;L22、L24、L26、L71和L96菌株发酵上清液对大肠杆菌K88、K99和鸡白痢沙门氏菌均有较好的抑制效果;L96菌株对60℃C温度具有一定耐受性;L71和L96对抗生素最低耐受量在益生菌的测定在相对较低的浓度范围内。编号为L22、L24、L26、L71和L96的乳酸菌具有较好的抑菌作用,其中L71的耐酸性、抑菌性以及产酸性能,有用做发酵饲料生产接种益生菌的潜力。3乳酸菌发酵饲料的特性研究试验以无抗饲料为发酵底物,比较分析了来自于试验二中的不同乳酸菌对发酵饲料的干物质、pH值、乳酸、VFA及饲料中乳酸菌和大肠杆菌菌落数的影响。结果显示,除L104菌株外,其他各组发酵饲料的pH值均低于4.5,蛋白质含量等均高于原饲料。接种L26、L35、L37和L71菌株的发酵饲料组的乳酸含量分别为249mmol/kg、243 mmol/kg、259.56 mmol/kg 和 234 mmol/kg,显著高于对照组(102.58 mmol/kg)(P0.05);接种L22号菌株的处理组的pH值显著低于对照组(P0.05)。针对L22、L37和L71菌株的发酵饲料在挥发性脂肪酸以及饲料乳酸菌和大肠杆菌的计数上的结果显示,除L37和L71号菌株在丙酸和异戊酸上有差异外,其他各挥发酸含量并无差异。较原料相比,上述三株菌以及自然发酵能增加了饲料中乳酸菌数量,但大肠杆菌的数量显著低于自然发酵组饲料(P0.05),结果说明,L22、L37和L71菌株在发酵饲料中可产生大量乳酸等物质,进而降低了饲料pH值;此外,上述菌株还可增加发酵饲料的乳酸菌数量,抑制饲料中大肠杆菌数量,结果显示,L22、L37和L71菌株均可用于发酵饲料生产接种菌株。
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【学位授予单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S816

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