猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶单克隆抗体制备及鉴定

发布时间：2018-12-15 03:21

【摘要】：为制备猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(skMLCK)的特异性单克隆抗体,设计合成多肽并与载体蛋白偶联,经细胞融合、培养基筛选、阳性细胞的检测与单克隆化后,获得3株能稳定分泌抗skMLCK单克隆抗体的杂交瘤细胞株;种植BALB/c小鼠腹腔,收集腹水,纯化后得到skMLCK的单克隆抗体。分别应用高效液相色谱、质谱和Western blot对纯化单克隆抗体进行抗体纯度、效价和敏感性检测。结果显示:获得的猪skMLCK单克隆抗体,能特异性识别skMLCK纯化蛋白、猪肌肉组织的内源性蛋白。本试验成功制备了能特异性结合猪skMLCK的单克隆抗体,这为今后进一步研究探讨skMLCK对猪肌肉发育的影响提供物质基础。
[Abstract]:In order to prepare specific monoclonal antibody against porcine skeletal myosin light streptokinase (skMLCK), the peptide was designed and conjugated with carrier protein. Three hybridoma cell lines were obtained which could stably secrete monoclonal antibodies against skMLCK. BALB/c mice were implanted intraperitoneally, ascites were collected, and monoclonal antibodies against skMLCK were obtained after purification. The purity, titer and sensitivity of purified monoclonal antibody were detected by high performance liquid chromatography, mass spectrometry and Western blot, respectively. The results showed that the obtained monoclonal antibody to porcine skMLCK could specifically recognize the purified protein of skMLCK and the endogenous protein of porcine muscle tissue. In this study, monoclonal antibodies capable of specifically binding porcine skMLCK were successfully prepared, which provided a material basis for further study on the effects of skMLCK on pig muscle development.
【作者单位】： 南京农业大学动物医学院;锦州医科大学畜牧兽医学院;辽宁省畜产品质量与安全工程重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金项目(31272415) 科技部国家星火计划重点项目(2015GA650005) 辽宁省自然科学基金(2015020765) 辽宁省科学技术计划项目(2015211003) 锦州医科大学第二批领军人物团队项目
【分类号】：S828

【参考文献】

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【共引文献】

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【二级参考文献】

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本文编号：2379873