鹅肥肝形成过程中调控SCD1基因的miRNA研究

发布时间：2018-12-26 08:11

【摘要】：microRNA(miRNA)是一类约22m的内源性非编码单链RNA分子,它广泛存在于病毒、动物和植物等多种生物体中,通过与靶基因3'UTR区结合,使得靶mRNA翻译抑制或降解,从而对基因的表达起负性调节作用,是基因表达的重要调控因子。SCD1是位于内质网上的一类催化酶,是肝细胞合成单不饱和脂肪酸的限速酶,能够将软脂酰和硬脂酰辅酶A分别转化成棕榈油酸和油酸,这些不饱和脂肪酸是合成各种脂类包括甘油三酯、磷脂、胆固醇、蜡酯以及甘油二酯的重要底物。SCD1在肝脏的脂质代谢中,即在脂肪合成与脂肪酸氧化中,都发挥着举足轻重的作用,本实验对朗德鹅肝脏SCD1基因的表达及其调控1niRNA进行筛选研究。主要实验结果如下：(1)填饲过程中,朗德鹅的肝脏重量和肝体比随着填饲时间的延长逐渐增加,70日龄(填饲0天)时肝脏的平均重量为124.5g,89日龄(填饲19天)时肝脏平均重量上升为826.6g;70日龄时平均肝体比为3.21%,89日龄时,平均肝体比达10.30%。本实验采用荧光定量PCR测定朗德鹅SCD1基因在填饲各阶段和对照组各阶段表达量变化趋势,结果显示填饲组各阶段表达量均高于对照组,且填饲19天(89日龄)时,填饲组表达量极显著高于对照组；测定填饲组各时期棕榈油酸、油酸、甘油三酯和胆固醇含量,并分析填饲组各阶段SCD1基因与各指标之间的相关性,SCD1基因表达量与油酸、胆固醇、VLDL极显著正相关(P0.01),与甘油三酯含量显著正相关(P0.05)。(2)通过软件预测结合前期小RNA测序结果,筛选出调控鹅SCD1基因的]miRNA为miR-30b, miR-30a-5p和miR-10b,利用SYBR Green染料法荧光定量PCR测定各miRNA在填饲组各时期与对照组各时期表达量变化情况,对照组表达量均高于填饲组,与SCD1基因的表达变化情况相反。(3)从朗德鹅中扩增出鹅miR-30b和]miR-30a-5p前体序列,经测序,与鸡的miR-30b和miR-30a-5p前体同源性都达到100%。利用双荧光素酶报告系统在CHO细胞系中验证所筛选的3个miRNA,结果显示miR30b与miR-30a-5p为调控鹅SCD1基因的miRNA。揭示miR-30b和miR-30a-5p可能通过对SCD1基因的调节作用影响鹅肝脏脂代谢过程。
[Abstract]:MicroRNA (miRNA) is a class of endogenous non-coding single-stranded RNA molecules of about 22m. It widely exists in many organisms, such as viruses, animals and plants. By binding to the target gene 3'UTR region, target mRNA translation is inhibited or degraded. SCD1 is a kind of catalytic enzyme located in the endoplasmic reticulum and a rate-limiting enzyme for the synthesis of monounsaturated fatty acids in hepatocytes. They are capable of converting palmitic acid and stearyl coenzyme A into palmitic acid and oleic acid, respectively. These unsaturated fatty acids synthesize a variety of lipids, including triglycerides, phospholipids, cholesterol, SCD1 plays an important role in the lipid metabolism of the liver, that is, in fat synthesis and fatty acid oxidation. The aim of this study was to screen the expression of SCD1 gene and its regulation of 1niRNA in the liver of Landau Goose. The main results were as follows: (1) the liver weight and liver body ratio of Landes geese increased gradually with the prolongation of feeding time, and the average weight of liver was 124.5 g at 70 days of age (feeding 0 days). The average weight of liver increased to 826.6g at 89 days of age (19 days of feeding). At the age of 70 days, the average body weight ratio was 3.21% and the average body weight ratio was 10.30% at the age of 89 days. In this experiment, fluorescence quantitative PCR was used to determine the change trend of SCD1 gene expression in all stages of feeding and control groups. The results showed that the expression of SCD1 gene in the feeding group was higher than that in the control group, and at the age of 19 days (89 days), the expression level of the SCD1 gene in the feeding group was higher than that in the control group. The expression level in the feeding group was significantly higher than that in the control group. The contents of palmitic oil acid, triglyceride and cholesterol in each stage of feeding group were measured, and the correlation between SCD1 gene and indexes in each stage of feeding group was analyzed. The expression of SCD1 gene was positively correlated with oleic acid, cholesterol and VLDL (P0.01). There was a significant positive correlation between triglyceride content and triglyceride content (P0.05). (2). By software prediction and sequencing results of small RNA in the early stage, the miRNA of goose SCD1 gene was selected to be miR-30b, miR-30a-5p and miR-10b,. SYBR Green dye fluorescence quantitative PCR was used to determine the changes of miRNA expression in each stage of feeding group and control group. The expression of miRNA in control group was higher than that in feeding group. Contrary to the change of SCD1 gene expression. (3) goose miR-30b and] miR-30a-5p precursor sequences were amplified from Langde geese, and the homology with miR-30b and miR-30a-5p precursors was 100%. Using the double luciferase report system to verify the three miRNA, screened in CHO cell line, the results show that miR30b and miR-30a-5p are the miRNA. to regulate the SCD1 gene of goose. It was suggested that miR-30b and miR-30a-5p might influence the lipid metabolism of goose liver by regulating the SCD1 gene.
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S835

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本文编号：2391791