猪IRF3和IRF7基因对TLR4信号通路中关键基因表达的影响

发布时间：2019-01-21 15:40

【摘要】：I型IFN能抑制多种病毒、细菌、寄生虫以及细菌和病毒的混合感染,在猪病防治中引起了关注。IRF3和IRF7在I型IFN的表达和分泌上均发挥重要调节作用,二者都能被LPS激活,发生磷酸化,进而调节I型IFN的表达和分泌。目前对IRF3和IRF7的研究主要集中在人和鼠,有关猪IRF3和IRF7基因功能的研究较少。本文利用PB载体系统构建猪IRF3和IRF7基因真核表达载体,转染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选,荧光显微镜观察细胞能否发出绿色荧光,实时定量PCR检测细胞中IRF3和IRF7基因mRNA表达水平,建立过表达IRF3和IRF7基因的细胞系;LPS和LiCl处理细胞,实时定量PCR检测TLR4信号通路中关键基因mRNA的表达水平,探讨IRF3和IRF7对TLR4介导的信号通路的作用,为进一步揭示IRF3和IRF7在猪病防治中的作用机制提供前期实验基础。结果表明,转染细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,实时定量PCR结果显示,与空载体转染组相比,转染PB-IRF3和PB-IRF7的细胞中IRF3和IRF7 mRNA表达水平显著升高,差异极显著(P0.001),表明IRF3和IRF7基因在PK15细胞中实现了过表达;与空载体转染组相比,IRF3和IRF7基因转染组细胞中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表达水平高,IL-6 mRNA表达水平低,且IRF3转染组中My D88、TBK1和IL-6 mRNA表达差异显著(P0.05),IRF7转染组中TRAF6和IFNαmRNA表达差异显著(P0.05),其余基因表达差异不显著;LPS处理后,空载体转染组及IRF3和IRF7基因转染组中上述被检测基因mRNA表达水平均升高,IRF3转染组中IFNα和IL-6 mRNA表达差异显著(P0.05),IRF7转染组中IFNα和NF-κB mRNA表达差异显著(P0.05),其余基因表达差异不显著;LiCl抑制LPS激活的TBK1活性后,IRF3和IRF7的表达水平发生下调,空载体转染组及IRF3和IRF7基因转染组中My D88、TRAF6、TBK1、NF-κB和IFNαmRNA表达水平下降,IL-6 mRNA表达水平上升。IRF3基因转染组中My D88、TBK1、IL-6和IFNαmRNA表达差异显著(P0.05),IRF7基因转染组中TRAF6、TBK1和IFNαmRNA表达差异显著(P0.05)。结果表明,猪IRF3和IRF7基因能提高PK15细胞中上游分子TBK1和下游基因IFNαmRNA表达,降低TLR4介导的信号通路中的炎性基因IL-6 mRNA的表达,提高炎性基因上游分子My D88、TRAF6、NF-κB等基因mRNA的表达。提示IRF3和IRF7不仅诱导I型IFN的表达,还参与LPS激活的TLR4介导的炎症反应过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828

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本文编号：2412787