鸡内源白血病病毒ev21与慢羽非连锁分析和LTR区启动子活性分析

发布时间：2019-01-24 20:33

【摘要】：旨在分析鸡内源ev21病毒与慢羽的连锁关系及其结构特征和启动子活性,为建立无内源ev21病毒的慢羽种鸡提供检测方法,并对ev21的启动转录活性进行探索。长片段PCR扩增获得鸡内源ev21病毒基因序列,检测太行鸡、坝上长尾鸡、海兰褐、海兰灰及其祖代五个品系259份样本的病毒携带情况。利用NCBI数据库Blast比对分析并PCR获得病毒基因全长。构建ev21基因5′和3′LTR区的pGL3-basic重组质粒转染A375细胞检测其启动子活性。结果显示:获得完整ev21病毒基因组全长7 524bp,发现其反向插入在鸡Z染色体g.10681671-10681672之间,长片段7 590bp PCR检测发现ev21与海兰灰慢羽鸡完全连锁,但与太行鸡、坝上长尾鸡和海兰褐慢羽并不完全连锁,尤其海兰褐快羽公鸡ev21全部阳性。ev21基因5′LTR区具有高强度的启动子活性(P0.01),3′LTR区活性高于阴性对照,但差异不显著(P0.05)。综上,内源ev21病毒与鸡慢羽性状并不完全连锁,7 590bp长片段PCR为内源ev21病毒的筛查提供检测方法,ev21基因5′LTR区具有强启动子活性。
[Abstract]:The aim of this study was to analyze the linkage relationship between chicken endogenous ev21 virus and slow feather, its structural characteristics and promoter activity, to provide a method for the detection of ev21 without endogenous ev21 virus, and to explore the transcriptional activity of ev21. The gene sequence of chicken endogenous ev21 virus was amplified by long fragment PCR. The virus was carried out in 259 samples of Taihang chicken, Bashang long-tailed chicken, Hailan brown, Hailan ash and their ancestors. The full length of virus gene was obtained by Blast comparison and PCR analysis in NCBI database. The promoter activity of A375 cells was detected by transfection of pGL3-basic recombinant plasmid of ev21 gene 5 'and 3'LTR region. The results showed that the complete genome length of ev21 virus was 7 524bp. it was found that the whole genome was inserted into chicken Z chromosome g.10681671-10681672. The long fragment 7 590bp PCR showed that ev21 was completely linked to Hailan grey slow-feathered chicken, but it was found to be linked to Taihang chicken. The long tail chicken and the slow hairy feather of Hailan were not completely linked to each other, especially the ev21 fast feathering cock was all positive for ev21. The 5'LTR region of the ev21 gene had high activity of promoter (P0.01), and the activity of the 3'LTR region was higher than that of the negative control. But the difference was not significant (P0.05). In conclusion, the endogenous ev21 virus is not completely linked to chicken slow-feathering traits. The 7 590bp long fragment PCR provides a method for the screening and detection of endogenous ev21 virus. The 5'LTR region of ev21 gene has strong promoter activity.
【作者单位】： 河北农业大学动物科技学院;西北农林科技大学动物科技学院;中国农业科学院北京畜牧研究所;河北科技师范学院;
【基金】：河北省现代农业技术体系蛋鸡产业创新团队(HBCT2013090206) 河北省自然基金项目(C2015204176)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2414829