猪圆环病毒2型ORF3蛋白的表达及抗原性鉴定

发布时间：2019-03-24 14:08

【摘要】：为研究猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF3蛋白的免疫活性,对其进行了表达及初步鉴定。根据NCBI上PCV-2ORF3的基因序列(FR823451)设计特异性引物,扩增后将其插入pET28a表达载体构建了重组表达质粒pET-PCV-2-ORF3,转化E.coli BL21(DE3)诱导表达后用SDS-PAGE和免疫印迹进行了鉴定。随后又用圆环病毒野毒感染猪和重组ORF2免疫小鼠的阳性血清对表达蛋白的免疫原性进行了检测。结果表明,构建成功的pET-PCV-2-ORF3表达菌被诱导后能大量表达PCV-2 ORF3蛋白。ORF3表达蛋白能与圆环病毒野毒感染猪的阳性血清发生特异性反应,与重组疫苗免疫鼠的阳性血清不能发生反应,表明ORF3蛋白具有很好的免疫原性和反应原性,有望作为圆环病毒野毒感染检测的靶抗原。
[Abstract]:In order to study the immune activity of porcine circovirus type 2 (PCV-2) ORF3 protein, its expression and preliminary identification were carried out. According to the gene sequence (FR823451) of PCV-2ORF3 on NCBI, specific primers were designed and inserted into pET28a expression vector to construct the recombinant expression plasmid pET-PCV-2-ORF3,. The expression of transformed E.coli BL21 (DE3) was identified by SDS-PAGE and Western blot. The immunogenicity of the expressed protein was detected by the positive serum of recombinant ORF2 immunized mice and pigs infected with circovirus wild virus. The results showed that the successfully constructed pET-PCV-2-ORF3-expressing strain could express a large amount of PCV-2 ORF3 protein after induction, and the ORF3 expression protein could react specifically with the positive sera of pigs infected with circovirus wild virus. The positive sera of mice immunized with recombinant vaccine could not react, which indicated that ORF3 protein had good immunogenicity and reactivity, and could be used as a target antigen for detection of field virus infection of circovirus.
【作者单位】： 沈阳农业大学畜牧兽医学院;
【基金】：沈阳农业大学2015年大学生创新训练项目
【分类号】：S852.651

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