内脂素对LPS诱导的炎症反应及p38信号通路的调节

发布时间：2019-04-25 15:50

【摘要】：内脂素(Visfatin)是一种脂肪细胞因子。研究发现,Visfatin与糖尿病、肥胖、炎症以及代谢综合征有着紧密的联系,其与炎症反应的相关研究已成为一个新的热点,而p38信号通路作为MAPK通路里的一个亚型,是炎症反应中的一个重要参与者。本研究用LPS刺激构建免疫应激引起的炎症模型,通过观察Visfatin对细胞活性和相关炎症因子的影响,Visfatin和p38信号通路之间的关系,以明确Visfatin在参与炎症反应时的作用及途径,为探寻Visfatin在治疗炎症疾病方面提供新的思路。具体研究内容及结果如下:1 Visfatin和LPS对RAW264.7细胞形态和活力的影响MTT试验结果发现,随着Visfatin和LPS浓度的改变,RAW264.7细胞形态、数量和活力均发生变化。当Visfatin浓度达到200 ng/m L,细胞数量明显增加,以圆形细胞为主,细胞聚集生长,而且细胞活力达到峰值(P0.01);Visfatin浓度超过200 ng/m L时,细胞数量明显减少,许多细胞体积变大,细胞内出现空泡,细胞活力开始下降。当LPS的浓度达到10 ug/m L时,细胞伪足增多,许多细胞体积变大,细胞出现空泡,部分细胞破裂,细胞的活力最强(P0.05);继续加大LPS的剂量,细胞中空泡更为明显,破裂的细胞也显著增多,细胞的活力显著下降;在50 ug/m L时细胞活力已经小于对照组的细胞活力,说明高剂量的Visfatin和LPS对RAW264.7细胞有一定的毒性作用。2不同组RAW264.7细胞内IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表达ELISA结果显示,与对照组相比,Visfatin的加入可以显著上调IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α(P0.05)的表达;在LPS组中,IL-1β、IL-10、TNF-α的表达与比对照组相比有明显增加(P0.05);而与LPS组相比,在Visfatin+LPS组中IL-1β、IL-10、TNF-α的表达显著下降(P0.05)。3不同组大鼠肝脏中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表达体内试验结果显示,和生理组相比,Visfatin和LPS组中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表达均显著升高(P0.01);与LPS组相比,Visfatin+LPS组中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α却显著下降(P0.01);其中肝脏中IL-1β、IL-10、TNF-α的表达规律和细胞试验中的结果一致。4不同处理组大鼠肝脏内髓过氧化物酶的表达免疫组化结果显示,MPO阳性产物呈棕褐色,细胞质和细胞核中均有分布。肝脏中分布广泛,主要位于肝脏门管区附近。数据统计结果表明,与生理盐水组相比,visfatin组的MPO显著减少(P0.05),而LPS组肝脏中MPO略为减少,差异不显著(P0.05),而和LPS组相比,在visfatin+LPS组肝脏中的MPO却显著减少(P0.05)。结果表明visfatin可以减少肝脏中MPO的表达,而在LPS刺激后,visfatin更是减少了MPO的表达。5 Visfatin对p38信号通路的影响添加p38的抑制剂SB203580之后,与单独加入Visfatin相比,IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α均发生了显著下调(P0.01),结果表明Visfatin是通过p38信号通路来调节IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的表达的。Western Blot试验结果显示,与PBS组相比,Vifatin组中p38的表达水平显著升高(P0.05);与LPS组相比,Visfatin+LPS组的p38水平显著升高(P0.05)。而在观察P-p38的表达时发现,与PBS组相比,Visfatin组中的P-p38的表达显著下降(P0.05);与LPS组相比,Visfatin+LPS组的P-p38水平显著下降(P0.05)。结果表明Visfatin可能是通过上调p38和下调P-p38的表达来调节机体的炎症反应的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.3

【参考文献】