牛源致病性大肠杆菌O157:H7的分离鉴定及对其小鼠疾病模型的中药治疗效果

发布时间：2019-05-06 08:28

【摘要】：目的:研究新疆肉牛主产区健康牛群中大肠杆菌O157:H7的携带状况及致病力,分离菌株建立动物疾病模型,并用白头翁汤及郁金散对其进行防治。方法:1、在新疆伊犁地区、阿勒泰地区、塔城地区的牛场采集健康牛的423份新鲜牛粪样本,增菌后用SMAC平板和MUG实验进行筛选,再用PCR方法和生化试验鉴定;对分离鉴定到的E.Coli O157:H7用PCR方法检测其Stx1、Stx2、eae A、tccp和Hly等基因携带情况;用鉴定到的菌株EC肉汤增菌后腹腔注射进行动物攻毒实验,确定分离菌株的致病性。2、再对健康昆明系小鼠进行分组,分别灌服不同浓度的E.Coli O157:H7菌液,按改良寇氏法计算出该菌株对小鼠的LD50,建立动物疾病模型。3、对健康昆明系小鼠随机进行分组,根据小鼠的体重按照高、中、低剂量灌服中药,观察检测小鼠在用药期间临床症状、脾脏系数及血清中TNF-α、IL-17水平的变化,从而确立中药组方的安全性和对免疫作用的影响。4、实验动物感染E.Coli O157:H7 12 h后用白头翁汤、郁金散进行治疗,从临床症状、脾脏系数及血清中TNF-α、IL-17水平的变化,分析中药组方治疗动物感染E.Coli O157:H7后,其免疫作用以及抑菌和抗炎的作用。结果:1、新疆伊犁地区的85份粪样中鉴定出1株E.coli O157:H7,检出率为1.176%;而这株菌同时携带被检测的5种毒力基因(Stx1、Stx2、eae A、tccp、Hly);新疆塔城与阿勒泰地区的检出率为0%。攻毒实验所有的实验动物于24 h内全部死亡。2、本实验成功建立E.coli O157:H7感染的动物疾病模型,菌株LD50为1.0×105 cfu/m L。3、动物在服用不同浓度的白头翁汤及郁金散后脾脏系数无统计学意义(P0.05);5 d与1 d相比,郁金散低剂量组显著降低TNF-ɑ的分泌量(P0.05),其余组极显著地降低(P0.01);白头翁汤高、低剂量组及郁金散高、中剂量组能显著地降低IL-17的分泌量(P0.05);其余剂量组则极显著降低(P0.01)。4、感染E.Coli O157:H7后灌服白头翁汤、郁金散,5 d与1 d相比,感染小鼠的TNF-ɑ与IL-17均降低到感染前范围内(P0.05)。结论:新疆伊犁地区有牛群携带致病性大肠杆菌O157:H7,从分离到的菌株对小白鼠致病性实验结果发现,这株菌对人有很强的潜在致病性,并成功建立动物疾病模型。实验证明白头翁汤及郁金散无毒副作用,用两组方进行治疗,结果发现两组方的常规剂量组具有降低感染E.Coli O157:H7对机体损伤的作用,具有较强的抗炎能力。
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【学位授予单位】：新疆农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S853.31

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