4个种属Mx蛋白抑制水疱性口炎病毒的研究

发布时间：2019-07-18 07:19

【摘要】：[目的]本试验旨在研究4个种属(猪、人、小鼠、牛)Mx蛋白抗水疱性口炎病毒(VSV)的活性,以揭示胞质定位Mx蛋白抗VSV活性的保守性。[方法]设计特异性引物,PCR扩增4个种属Mx蛋白的全长基因,构建真核表达质粒;PK-15细胞过表达重组质粒,Western blot或间接免疫荧光试验(IFA)检测4个种属Mx蛋白在PK-15细胞内的表达及分布;过表达Mx蛋白的PK-15细胞感染VSV,8或16 h后收样,分别用RT-q PCR、Western blot、IFA和噬斑减少试验来分析VSV的复制。[结果]成功克隆并表达了4个种属Mx蛋白的全长基因,且Mx蛋白大小正确;虽然猪Mx1蛋白和小鼠Mx2蛋白以棒状形式分布于细胞质中,而猪Mx2蛋白、人Mx A蛋白和牛Mx1蛋白以颗粒形式弥散分布于细胞质中,但4个种属Mx蛋白均能通过抑制VSV-G mRNA的转录、减少VSV-G蛋白的合成及降低子代病毒的滴度来显著抑制VSV的增殖。[结论]4个种属Mx蛋白都能显著抑制VSV在PK-15细胞中的增殖。
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图片说明： 第4期高志参，等:4个种属Mx蛋白抑制水疱性口炎病毒的研究标准序列均成功切出2条大小正确的目的条带。将酶切结果正确的重组质粒进行测序鉴定，测序结果与目的基因进行序列比对，结果完全正确。这说明成功构建了真核表达质粒:pcDNA3．0－poMx1、pcDNA3．0－poMx2、pcDNA3．0－HuMxA、pcDNA3．0－mmMx2、pcDNA3．0－boMx1。图1PCＲ扩增结果Fig.1ＲesultsofPCＲamplificationM．DNAmarker(DL5000);1．poMx1;2．poMx2;3．HuMxA;4．mmMx2;5．boMx1图2重组质粒的双酶切鉴定Fig.2DoubledigestionidentificationoftherecombinantplasmidsM．DNAmarker(DL5000);1．pcDNA3．0－poMx1;2．pcDNA3．0－poMx2;3．pcDNA3．0-HuMxA;4．pcDNA3．0－mmMx2;5．pcDNA3．0－boMx1;6．pcDNA3．0图44个种属Mx蛋白在PK-15细胞中表达分布的IFA观察Fig.4IFAobservationofexpressionanddistributionofMxproteinsfromfourspeciesinPK-15cells图34个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的表达分析Fig.3AnalysisofexpressionofMxproteinsfromfourspeciesinPK-15cellsCK:空白细胞对照Blankcontrol2．24个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的表达活性4个种属Mx蛋白在PK-15细胞中过表达24h后进行Westernblot分析，结果(图3)显示:在PK-15细胞中，4个种属Mx蛋白均成功过表达，经鉴定，poMx1、poMx2、HuMxA、mmMx2、boMx1的相对分子质量分别为76×103、82×103、75．8×103、75×103、74．3×103。2．34个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的分布IFA结果(图4)显示:在PK-15细胞中，poMx1蛋白及mmMx2蛋白均以棒状形式分布于细胞质中;poMx2、HuMxA及boMx1蛋白均以颗粒形式弥散分布于细胞质中。2．44个种属Mx蛋白的抗VSV活性分析2．4．1ＲT-qPCＲ分析结果(图5)显示:在感?
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图片说明： 第4期高志参，等:4个种属Mx蛋白抑制水疱性口炎病毒的研究标准序列均成功切出2条大小正确的目的条带。将酶切结果正确的重组质粒进行测序鉴定，测序结果与目的基因进行序列比对，结果完全正确。这说明成功构建了真核表达质粒:pcDNA3．0－poMx1、pcDNA3．0－poMx2、pcDNA3．0－HuMxA、pcDNA3．0－mmMx2、pcDNA3．0－boMx1。图1PCＲ扩增结果Fig.1ＲesultsofPCＲamplificationM．DNAmarker(DL5000);1．poMx1;2．poMx2;3．HuMxA;4．mmMx2;5．boMx1图2重组质粒的双酶切鉴定Fig.2DoubledigestionidentificationoftherecombinantplasmidsM．DNAmarker(DL5000);1．pcDNA3．0－poMx1;2．pcDNA3．0－poMx2;3．pcDNA3．0-HuMxA;4．pcDNA3．0－mmMx2;5．pcDNA3．0－boMx1;6．pcDNA3．0图44个种属Mx蛋白在PK-15细胞中表达分布的IFA观察Fig.4IFAobservationofexpressionanddistributionofMxproteinsfromfourspeciesinPK-15cells图34个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的表达分析Fig.3AnalysisofexpressionofMxproteinsfromfourspeciesinPK-15cellsCK:空白细胞对照Blankcontrol2．24个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的表达活性4个种属Mx蛋白在PK-15细胞中过表达24h后进行Westernblot分析，结果(图3)显示:在PK-15细胞中，，4个种属Mx蛋白均成功过表达，经鉴定，poMx1、poMx2、HuMxA、mmMx2、boMx1的相对分子质量分别为76×103、82×103、75．8×103、75×103、74．3×103。2．34个种属Mx蛋白在PK-15细胞中的分布IFA结果(图4)显示:在PK-15细胞中，poMx1蛋白及mmMx2蛋白均以棒状形式分布于细胞质中;poMx2、HuMxA及boMx1蛋白均以颗粒形式弥散分布于细胞质中。2．44个种属Mx蛋白的抗VSV活性分析2．4．1ＲT-qPCＲ分析结果(图5)显示:在感?
【作者单位】： 南京农业大学动物医学院;
【基金】：国家自然科学基金项目(31572554)
【分类号】：S852.65

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本文编号：2515727