猪源益生细菌的分离鉴定与生物学特性的研究

发布时间：2019-07-23 12:59

【摘要】：益生菌制剂是一种新型饲料添加剂,由于其绿色环保、无公害无残留的特点,逐渐成为代替抗生素的最优选择。饲用益生菌能够有效的避免抗生素药物残留和耐药性的产生所带来的一系列危害,并且还能调节胃肠道平衡,抑制病原菌的繁殖,促进畜禽的生长发育。本实验通过对猪粪便与微生态发酵饲料中益生细菌进行分离鉴定,并对其生物学特性和体内抑菌试验进行研究,从而为猪源微生态制剂的研制与开发提供理论基础。本实验对采集的15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料进行益生细菌的分离,通过研究细菌的形态学特性,生理生化特性以及16SrRNA分子序列共鉴定出29株益生细菌,包括1株屎肠球菌(C2)、2株乳酸肠球菌(C1、C3)、3株植物乳杆菌(R20、R30、R37)、4株干酪乳杆菌(R41-R44)、7株枯草芽孢杆菌(K1-K7)和12株蜡样芽胞杆菌(Y1-Y12)。通过生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、体外抑菌试验、耐药性试验对分离菌株进行生物学特性的研究分析,并从分离得到的6个种类的益生细菌中各筛选出1株具有优良特性的菌株,分别是乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1、蜡样芽孢杆菌Y3。分别用上述6株益生细菌对小白鼠进行灌胃,每天观察其健康状况并记录其体重,通过14天的观察,小鼠均健康存活无一死亡,说明了 6株益生细菌对小白鼠是安全无毒害的。用SPSS软件统计分析小鼠增重情况,结果显示,与对照组相比,灌胃了C2、R20、R41、Y3这4株益生细菌能够极显著提高小鼠的体重(P0.01),K1对小鼠增重的提高有显著作用(P0.05)。说明这5株益生细菌都对小鼠的增重起到不同程度的促进作用,具有良好的促生长性能。为分析这6株益生细菌在小鼠体内的抑菌作用和保护能力,试验利用沙门氏菌对连续灌胃7天益生菌后的小鼠进行感染,结果显示与对照组相比,C1、R20、K1能够降低沙门氏菌感染小鼠的死亡率,说明这3株益生细菌具有一定程度的体内抑菌作用。综上所述,R20和K1具有优良耐受能力,并且能显著促进小鼠体重增长,具有一定的体内抑菌作用,可选择作为优良益生菌制剂的菌株。
【图文】：

图１－２光学显微镜下部分分离菌株的形态特征逡逑Ａ：邋Ｃｌ，邋Ｂ：邋Ｃ２，邋Ｃ：邋Ｒ２０，邋Ｄ：邋Ｒ４１，邋Ｅ：邋Ｙ３，邋Ｆ：邋Ｋｌ，Ｘ１０００光学显微昁下逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｍｏｉｐｈｏｌｏｇｉｅｓ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ｉｓｏｌａｔｅｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ逡逑Ａ：邋Ｃｌ，邋Ｂ：邋Ｃ２，邋Ｃ：邋Ｒ２０，邋Ｄ：邋Ｒ４１，邋Ｅ：邋Ｙ３，邋Ｆ：邋Ｋｌ，邋Ｘ１邋000ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ逡逑１８逡逑

广西大学兽医硕士学位论文逦猪源益生细菌的分商|=定与生物学特性的研究逡逑ＰＣＲ产物，送至杰李生物公司进行测序。逡逑２９株分离菌的１６ＳｒＲＮＡ基因序列在ＧｅｎＢａｎｋ进行ＢＬＡＳＴ对比，运用ＭｅｇＡｌｉｇｎ和逡逑ＭＥＧＡ６．０软件进行同源性与遗传进化分析，并制作了部分菌株的同源性分析表（图１－４）逡逑和遗传进化树（图１－４）。结果表明：Ｃ２与参考菌株五／ａｅｃ／＿邋（ＬＣ１９３７２４．１）、五／ａｅｄ＿逡逑（ＫＹ９６３４５７．１邋）在同一分枝上，同源性达到１００％，，因此可判定Ｃ２为屎肠球菌。同样法可判定Ｃ１和Ｃ３为乳酸肠球菌，Ｒ２０、Ｒ３０、Ｒ３７为植物乳杆菌，Ｒ４１－Ｒ４２为干酪乳杆菌，逡逑Ｙ１－Ｙ１２为蜡样芽孢杆菌，Ｋ１－Ｋ７为枯草芽孢杆菌。逡逑Ｍ邋１逦２逦３逦４逦５逦６逦７８９逦１０逦１１邋Ｎ逡逑
【学位授予单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S816.3

【参考文献】

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本文编号：2518169