猪戊型肝炎病毒液相蛋白芯片检测方法的建立

发布时间：2019-07-24 06:55

【摘要】：构建了ORF2蛋白原核表达体系Rosetta-pMAL-c5X-ORF2,经IPTG诱导表达后,对重组蛋白进行SDSPAGE和Western blot分析,并采用镍柱亲和层析法进行纯化,以该蛋白为抗原建立液相蛋白芯片检测方法。结果显示:本试验成功表达了可溶性ORF2蛋白,具有良好的抗原性。液相蛋白芯片检测方法对猪常见的其他疾病阳性血清无交叉反应,其批内、批间变异系数分别为5%和6.6%。对102份临床血清样本检测结果显示,该方法与商品化ELISA试剂盒符合率为93.1%,关联性卡方检验显示2个方法具有一致性(P0.01)。本试验为临床HEV血清抗体的检测提供了一种特异、灵敏的新型快速检测技术,为建立猪病多重检测方法提供了基础。
[Abstract]:The prokaryotic expression system Rosetta-pMAL-c5X-ORF2, of ORF2 protein was constructed and expressed by IPTG. The recombinant protein was analyzed by SDSPAGE and Western blot, and purified by nickel column affinity chromatography. The protein was used as antigen to establish a liquid phase protein chip detection method. The results showed that soluble ORF2 protein was successfully expressed and had good antigenicity. There was no cross reaction to the positive serum of other common diseases in pigs by liquid phase protein chip detection, and the coefficients of variation between batches and between batches were 5% and 6.6%, respectively. The results of 102 clinical serum samples showed that the coincidence rate between this method and commercial ELISA kit was 93.1%, and the correlation chi-square test showed that the two methods were consistent (P 0.01). This study provides a specific and sensitive new rapid detection technique for the detection of serum antibodies against HEV in clinic, and provides a basis for the establishment of multiple detection methods for pig diseases.
【作者单位】： 华南农业大学兽医学院;
【基金】：现代农业产业技术体系建设专项资金项目(CARS-36)
【分类号】：S852.651

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