版纳微型猪近交系TSARG7基因克隆及功能生物信息学分析

发布时间：2019-07-25 17:13

【摘要】：为获得版纳微型猪近交系(Banna Mini-pig inbred line,BMI)TSATG7基因序列并分析组织表达情况,本研究以GenBank中猪及近缘物种的TSARG7基因mRNA序列为参考序列,设计特异引物扩增BMI TSARG7基因,半定量分析10个重要组织的表达谱,并对蛋白质序列进行功能生物信息学分析。结果显示,获得了BMI TSARG7基因1 371bp的编码区序列(GenBank登录号:KU950831,对应的氨基酸登录号:AMY60405),编码456个氨基酸,蛋白质分子质量为52.05ku,等电点(pI)为9.28。多组织表达分析表明,TSARG7基因在睾丸中高表达,在其他组织中呈中、低表达。功能生物信息学分析表明,TSARG7蛋白质存在1个保守结构域,有3个跨膜螺旋结构,无信号肽序列;N末端疏水,C末端亲水;有5类功能活性位点,位于细胞质的概率是94.1%。本试验结果为进一步研究TSARG7基因在猪精子发生和性成熟方面的作用及功能奠定基础。
【图文】：

８４８１０）、猴子（登录号：ＸＰ＿０１２６３２８７４）、黑猩猩（登录号：ＸＰ＿００１１３８８８８）、人（登录号：ＮＰ＿８４８９３４）、小鼠（登录号：ＮＰ＿０６１２１３）、大鼠（登录号：ＮＰ＿００１０４１３１４）６个物种的蛋白质序列进行比对，并构建多物种系统进化树。２结果２．１ＴＳＡＲＧ７基因ＰＣＲ扩增结果以睾丸ｃＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，结果发现，扩增产物长度为１７９６ｂｐ，与预期片段大小相一致（图１）。图１ＴＳＡＲＧ７基因ＰＣＲ扩增结果Ｆｉｇ．１ＴｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆＴＳＡＲＧ７ｇｅｎｅ２．２ＴＳＡＲＧ７基因序列及其编码的氨基酸序列测序结果发现，ＢＭＩＴＳＡＲＧ７基因全长编码序列１３７１ｂｐ，该序列已提交ＧｅｎＢａｎｋ，ｍＲＮＡ登录号为ＫＵ９５０８３１，其对应的氨基酸登录号为ＡＭＹ６０４０５。编码４５６个氨基酸，含有１个保守结构域ＬＰＬＡＴ＿ＬＰＣＡＴ１－ｌｉｋｅ（图２）。１６３９

版纳微型猪近交系TSARG7基因克隆及功能生物信息学分析

中国畜牧兽医４４卷ＡＴＧ，起始密码子；＊，终止密码子；下划线序列，蛋白质保守结构域（ＬＰＬＡＴ＿ＬＰＣＡＴ１－ｌｉｋｅ，２１８－４２７位氨基酸）ＡＴＧ，Ｓｔａｒｔｃｏｄｏｎ；＊，Ｓｔｏｐｃｏｄｏｎ；Ｕｎｄｅｒｌｉｎｅｓｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄｄｏｍａｉｎｓ（ＬＰＬＡＴ＿ＬＰＣＡＴ１－ｌｉｋｅ，２１８－４２７ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ）图２ＴＳＡＲＧ７基因编码区全长序列与翻译的氨基酸序列Ｆｉｇ．２ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃｏｄｉｎｇａｎｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＴＳＡＲＧ７ｇｅｎｅ２．３多组织半定量表达分析以１８ＳｒＲＮＡ为内参基因，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＴＳＡＲＧ７基因在ＢＭＩ（０８４７）共１０种组织中的转录水平，结果表明，ＴＳＡＲＧ７基因ｍＲＮＡ在睾丸中高度表达，在大脑、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胃和附睾中中度表达，在肺脏和小肠中低度表达（图３）。１，大脑；２，心脏；３，肝脏；４，，脾脏；５，肺脏；６，肾脏；７，胃；８，小肠；９，附睾；１０，睾丸１，Ｃｅｒｅｂｒｕｍ；２，Ｈｅａｒｔ；３，Ｌｉｖｅｒ；４，Ｓｐｌｅｅｎ；５，Ｌｕｎｇ；６，Ｋｉｄｎｅｙ；７，Ｓｔｏｍａｃｈ；８，Ｓｍａｌｌｉｎｔｅｓｔｉｎｅ；９，Ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ；１０，Ｔｅｓｔｉｓ图３ＴＳＡＲＧ７基因半定量多组织表达谱Ｆｉｇ．３Ｔｈｅｓｅｍｉ－ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｍｕｌｔｉ－ｔｉｓｓｕｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆ
【作者单位】：云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室;云南农业大学动物科学技术学院;云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心;
【基金】：国家自然科学基金项目(31660637、31460580、31660650)
【分类号】：S828

【参考文献】