复方板蓝根多糖对铅致NRK细胞损伤的保护作用及其机理研究

发布时间：2019-07-26 08:18

【摘要】：人们已经开始广泛关注铅对肾脏的毒性作用。目前,铅的毒性作用机理还不很清楚,驱铅药物的效果也不很理想。探索一种天然、低风险、残留少,有效预防治疗动物铅中毒的药物,可为防治铅中毒提供了新的思路和途径。研究目的:本试验通过研究复方板蓝根多糖对铅致大鼠肾小管上皮细胞氧化损伤的保护作用及对细胞凋亡线粒体通路的影响作用,探索复方板蓝根多糖对铅肾毒性的保护作用及其对细胞凋亡的调控作用机理。研究方法:(1)在体外培养的NRK细胞中,通过分别加入不同浓度的复方板蓝根多糖(终浓度分别为0、0.5、1、2、5、10、20、50、100μg/m L)以及不同浓度的醋酸铅(终浓度分别为0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)于37℃孵育24 h后,采用MTT法检测复方板蓝根多糖和醋酸铅对细胞相对活力的影响。(2)在此基础上,选用50μmol/L醋酸铅和2、10、50μg/m L复方板蓝根多糖,进行分组试验,通过采用WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性,紫外比色法检测细胞中总谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,显色底物法检测细胞中过氧化氢酶(CAT)的活性,以及硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞中丙二醛(MDA)的含量变化;荧光探针DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)的含量;用荧光Hoechst33258染色法、Annexin V-FITC/PI双染法和流式细胞仪检测复方板蓝根多糖对细胞凋亡的抑制作用。并用Western-Blot检测Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和P53蛋白的表达量变化。结果:在本试验设计的0.1、0.2、0.5、1、5、10、20、50、100μg/m L的复方板蓝根多糖中,当多糖浓度达到50~100μg/m L时,对NRK细胞的生长具有一定的促进作用;醋酸铅可抑制NRK细胞增殖。当其浓度大于1μmol/L时,即对细胞产生显著的抑制作用,且具有明显的剂量效应关系,当浓度达到10μmol/L时,可使细胞的存活率低于50%;50μg/m L多糖剂量组可明显降低醋酸铅对细胞的抑制作用;2、10、50μg/m L的复方板蓝根多糖,均可使染铅组细胞内SOD、GSH-Px、CAT的活性升高,同时降低细胞内的MDA含量。尤其是对GSH-Px和MDA的作用更加明显;复方板蓝根多糖浓度达2μg/m L以上时,可显著地减少染铅NRK细胞内ROS含量及凋亡率,且具有一定的剂量依赖性;复方板蓝根粗多糖可通过上调抑凋亡蛋白Bcl-2,下调促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表达量,阻止Procaspase-9和Procaspase-3的激活,从而阻断线粒体凋亡通路的激活和细胞凋亡的发生。结论:复方板蓝根多糖对NRK细胞具有一定的促生长作用;同时,可有效降低铅对NRK细胞诱导的氧化损伤作用;其作用机制可能是通过上调抑凋亡蛋白Bcl-2,下调促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表达,减少细胞的凋亡而实现的。
【学位授予单位】：河南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S853.7

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