鸡传染性支气管炎病毒XT株的分离鉴定及S1基因、M基因的序列分析

发布时间：2019-08-07 18:21

【摘要】：本研究从北京某集团公司邢台地区的肉鸡场,采集疑似鸡传染性支气管炎的发病鸡病料,从中分离得到一株病毒,命名为XT株,并对其理化及生物学特性进行鉴定,最终通过基因的测序、对比,来分析它的遗传变异性。无菌采集疑似患传染性支气管炎病鸡的气管、肾脏、腺胃等,研磨制成病毒液,在10日龄SPF鸡胚上传代,并收集尿囊液。尿囊液对鸡红细胞无直接血凝性,经1%胰酶处理后出现血凝现象;新城疫干扰试验显示XT株F5代尿囊液对新城疫Lasota株在鸡胚中的复制具有干扰作用,使其血凝效价下降了2~3个值;将XT株F5代尿囊液接种10日龄鸡胚144 h后,与对照组相比,试验组鸡胚发育迟缓,经SPSS V17分析两组鸡胚体重差异极显著,说明XT株对鸡胚具有致矮小作用;病毒回归试验动物后,鸡只出现了典型的IBV临床及解剖症状,且采集所有鸡只病料分离得到的病毒液,经IBV RT-PCR诊断试剂盒检测,对照组均为阴性,试验组绝大多数为阳性,说明试验鸡不同程度的感染了IBV。XT株理化特性试验表明:该病毒对酸(p H 3.0)碱(p H 11.0)均敏感,并且病毒对酸的耐受力要比对碱的耐受力略强;经56℃,1 h水浴加热,毒力下降了3个滴度,而添加Mg2+组毒力下降不到2个滴度,说明病毒对热敏感,Mg2+能提高其耐热性;病毒对有机溶剂乙醚、氯仿均敏感,处理后毒力均下降了2~3个滴度,以上特性均符合传染性支气管炎病毒的相关特性。经测定,XT株F5代病毒液的EID50为10-5.69/0.1ml;血清交叉中和试验结果显示:XT株与传支疫苗株H120、W93的关系系数分别为77.98%、44.88%,依据判定标准(R80%,两毒株为同一亚型;25%R80%,两毒株为同一血清型的不同亚型;R25%,两毒株为不同血清型),XT株与二者均为同一血清型的不同亚型。本试验对XT株的S1基因、M基因进行了克隆测序,并与Genbank中已发表的18个参考株S1基因、M基因进行了比较分析,结果显示,XT株S1基因与国内常用疫苗株H120、H52、Ma5、M41、W93的同源性仅为76%~77%,而与山东分离株WF同源率较高,核苷酸同源率为91.3%,氨基酸同源率为90.9%,M基因序列对比结果与S1基因基本一致,但M基因与各参考毒株序列同源性总体较S1基因高,说明M基因较S1基因保守。序列对比结果显示:XT株与当前国内广泛使用的疫苗株同源性较低,与一株山东分离株WF同源性较高。
【图文】：

3.2 血凝试验图 2 接种 XT 株 F10 代病毒 144h 后鸡胚Fig. 2 Dwarf embryo infected with F10 XTstrain after 144 h图 1 正常鸡胚（左）与接种 XT 株 F5 代病毒 144h 后鸡胚（右）Fig. 1 Normal embryo (left) and dwarfembryo infected with F5 XT strainafter 144 h (right)

3.2 血凝试验图 2 接种 XT 株 F10 代病毒 144h 后鸡胚Fig. 2 Dwarf embryo infected with F10 XTstrain after 144 h图 1 正常鸡胚（左）与接种 XT 株 F5 代病毒 144h 后鸡胚（右）Fig. 1 Normal embryo (left) and dwarfembryo infected with F5 XT strainafter 144 h (right)
【学位授予单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.65

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本文编号：2524104