Metalnikowin类抗菌肽MLP的设计及其抗菌活性的测定
发布时间：2019-08-12 18:38
【摘要】：为设计新型Metalnikowin类抗菌肽并评价其抗菌活性,依据抗菌肽Metalnikowin的作用机理和氨基酸组成,通过人工方法设计合成Metalnikowin类抗菌肽(Metalnikowin-like antibacterial peptide,MLP)并测定其体外和体内抗菌活性。体外抑菌试验结果显示,抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O 1、猪致病性大肠杆菌K 99(A TCC39302)、鸡白痢沙门菌(ATCC10398)、猪霍乱沙门菌(ATCC13312)、禽多杀性巴氏杆菌(CVCC474)和金黄色葡萄球菌(ATCC29213)均具有很好的抑菌活性,其对这6种细菌的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5 g/m L。酸稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP在p H值为5~6时活性最高。热稳定性试验结果显示,抗菌肽MLP 100℃加热40 min后仍具有抑菌活性。在对雏鸡感染鸡大肠杆菌和小鼠感染金黄色葡萄球菌的体内疗效试验中,抗菌肽MLP显示了较好的治疗效果。本研究为临床上设计有效的Metalnikowin类抗菌肽提供了参考数据。
【图文】：
多杀性巴氏杆菌P.multocida金黄色葡萄球菌S.aureusMetalnikowinⅠ15171713206MetalnikowinⅡ13018008MetalnikowinⅡB170150160抗菌肽MLP2119211825152.4抗菌肽MLP最小抑菌浓度的测定经微量稀释法检测，，抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O1、猪致病性大肠杆菌K99（ATCC39302）、鸡白痢沙门菌（ATCC10398）、猪霍乱沙门菌（ATCC13312）、禽多杀性巴氏杆菌（CVCC474）、金黄色葡萄球菌（ATCC29213）的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5g/mL。2.5抗菌肽MLP的热稳定性检测热稳定性试验结果（见图1）显示，抗菌肽MLP在加热煮沸后活性稍有下降，煮沸后第25分钟活性下降较快，但第40分钟仍然具有较高的抑菌活性，说明其热稳定性较好。2.6抗菌肽MLP在不同pH值缓冲液中的稳定性图2结果显示，抗菌肽MLP在pH5～6时最稳定，酸碱对抗菌肽MLP的活性均有一定的影响。2.7抗菌肽MLP对致病性细菌的体内抗菌活性接种鸡致病性大肠杆菌原浓度和接种1∶10稀图1抗菌肽MLP的热稳定性测定Fig.1Theheat-stabledeterminationofantibacterialpep-tideMLPbyboiling2520151050051015202530405060时间/minTime未煮沸的MLPUnboiledMLP煮沸的MLPBoiledMLP抑菌圈直径/mmInhibitionzonediameter844
境中抗菌肽是否能保证稳定不被胃酸降解消化。同时是否耐高温，从而适合与各种饲料混合造粒等因素。因此，抗菌肽的理化特性的研究多集中在抑菌特性、热稳定性，抗酸碱稳定性等临床更具实际价值的理化特性方面。本研究对于抗菌肽MLP的理化特性进行了分析，酸稳定性试验显示，抗菌肽MLP在pH值为5～6时活性最高；热稳定性试验显示抗252015105023456789101112pH值pHvaluesMLPtreatedwithPBSMLPtreatedwithdifferentpH抑菌圈直径/mmInhibitionzonediameter图2抗菌肽MLP的酸碱稳定性曲线Fig.2TheantibacterialactivityofantibacterialpeptideMLPaffectedbydifferentpH表4Metalnikowin类抗菌肽MLP对鸡大肠杆菌病的治疗效果（n＝20）Table4AntibacterialpeptideMLPtreatwithE.coliO1ofchicken组别Groups死亡率/％Mortalityrate保护率/％Protectionrate治愈率/％Curerate健康对照组Healthcontrolgroup0感染对照组Infectioncontrolgroup1001000环丙沙星组Ciprofloxacingroup455555MetalnikowinI组MetalnikowinIgroup653530MLP高剂量组MLPhighdosegroup505050MLP中剂量组MLPmiddledosegroup554545MLP低剂量组MLPlowdosegroup653535845
【作者单位】： 河南科技大学兽医肿瘤免疫学重点实验室;河南科技大学食品与生物工程学院;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室;
【分类号】：S859.797
本文编号：2525890
【图文】：
多杀性巴氏杆菌P.multocida金黄色葡萄球菌S.aureusMetalnikowinⅠ15171713206MetalnikowinⅡ13018008MetalnikowinⅡB170150160抗菌肽MLP2119211825152.4抗菌肽MLP最小抑菌浓度的测定经微量稀释法检测，，抗菌肽MLP对鸡致病性大肠杆菌O1、猪致病性大肠杆菌K99（ATCC39302）、鸡白痢沙门菌（ATCC10398）、猪霍乱沙门菌（ATCC13312）、禽多杀性巴氏杆菌（CVCC474）、金黄色葡萄球菌（ATCC29213）的最小抑菌浓度分别为1.56、6.25、3.12、6.25、1.56和12.5g/mL。2.5抗菌肽MLP的热稳定性检测热稳定性试验结果（见图1）显示，抗菌肽MLP在加热煮沸后活性稍有下降，煮沸后第25分钟活性下降较快，但第40分钟仍然具有较高的抑菌活性，说明其热稳定性较好。2.6抗菌肽MLP在不同pH值缓冲液中的稳定性图2结果显示，抗菌肽MLP在pH5～6时最稳定，酸碱对抗菌肽MLP的活性均有一定的影响。2.7抗菌肽MLP对致病性细菌的体内抗菌活性接种鸡致病性大肠杆菌原浓度和接种1∶10稀图1抗菌肽MLP的热稳定性测定Fig.1Theheat-stabledeterminationofantibacterialpep-tideMLPbyboiling2520151050051015202530405060时间/minTime未煮沸的MLPUnboiledMLP煮沸的MLPBoiledMLP抑菌圈直径/mmInhibitionzonediameter844
境中抗菌肽是否能保证稳定不被胃酸降解消化。同时是否耐高温，从而适合与各种饲料混合造粒等因素。因此，抗菌肽的理化特性的研究多集中在抑菌特性、热稳定性，抗酸碱稳定性等临床更具实际价值的理化特性方面。本研究对于抗菌肽MLP的理化特性进行了分析，酸稳定性试验显示，抗菌肽MLP在pH值为5～6时活性最高；热稳定性试验显示抗252015105023456789101112pH值pHvaluesMLPtreatedwithPBSMLPtreatedwithdifferentpH抑菌圈直径/mmInhibitionzonediameter图2抗菌肽MLP的酸碱稳定性曲线Fig.2TheantibacterialactivityofantibacterialpeptideMLPaffectedbydifferentpH表4Metalnikowin类抗菌肽MLP对鸡大肠杆菌病的治疗效果（n＝20）Table4AntibacterialpeptideMLPtreatwithE.coliO1ofchicken组别Groups死亡率/％Mortalityrate保护率/％Protectionrate治愈率/％Curerate健康对照组Healthcontrolgroup0感染对照组Infectioncontrolgroup1001000环丙沙星组Ciprofloxacingroup455555MetalnikowinI组MetalnikowinIgroup653530MLP高剂量组MLPhighdosegroup505050MLP中剂量组MLPmiddledosegroup554545MLP低剂量组MLPlowdosegroup653535845
【作者单位】： 河南科技大学兽医肿瘤免疫学重点实验室;河南科技大学食品与生物工程学院;南京农业大学农业部动物细菌学重点实验室;
【分类号】：S859.797
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本文编号：2525890
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