猪源益生性芽孢杆菌的筛选与抑菌活性研究

发布时间：2019-08-14 07:43

【摘要】：益生菌具有无毒、无残留、抗菌效果显著等特点,是绿色的抗生素替代物。其中芽孢杆菌具有耐高温、耐酸碱、抗逆性强、加工简单的特点,成为益生菌研究的重点。本课题以健康仔猪的新鲜粪便为样品,筛选出一株对病源指示菌有抗性的芽孢杆菌,进行了鉴定和条件优化,并对菌株的抗菌活性进行了初步研究,主要结果如下：通过革兰氏染色和芽孢染色的方法,从猪粪中筛选出37株芽孢杆菌,其中有11株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强抑制效果,并对这11株菌对猪胆盐、人工胃液、人工肠液和硫酸铜的耐受力进行了试验,考查了11株菌淀粉酶、蛋白酶、纤维酶的分泌能力。试验结果显示,猪肠源性芽孢杆菌对胆盐和人工消化液有较好的耐受性；微量元素铜离子对芽孢杆菌的增殖有抑制作用；芽孢杆菌都能产生淀粉酶,但是产纤维素酶和蛋白酶都不明显。从中挑选耐受性及产酶能力都比较好的一株YB5进行生理生化及16S rDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌。对枯草芽孢杆菌YB5的发酵进行了研究优化,提高了菌体生物量和芽孢生成率。通过单因素试验确定的最优发酵培养基为：葡萄糖2%,蛋白胨1%,硫酸镁0.02%,氯化钙0.02%,磷酸氢二钾：磷酸二氢钾为0.2：0.05(%)。通过单因素试验和正交试验确定最优发酵条件为：初始pH值为7,接种量7%,培养温度37℃,摇床转速150r/min。在优化条件下,YB5活菌数由2.03×109cfu/ml增长到3.83×109cfu/ml,提高了89%,芽孢形成率从77%提高到96%,较优化前提高了25%。以金黄色葡萄球菌为指示菌,对发酵液中抗菌物质的性质进行了初步研究。将发酵液离心上清液在不同温度下处理考查其抗菌活性,结果表明：40℃-70℃处理时,抑菌性没有明显变化,处理温度高于80℃抑菌性随着处理温度的升高而逐渐降低,121℃处理后,抑菌活性几乎消失。酸碱和有机溶剂处理后,上清液的抑菌活性有所下降。上清液对蛋白酶比较敏感,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶处理1h时,抑菌活性几乎消失。通过以上结果,可以初步判定枯草芽孢杆菌YB5产生的抑菌活性物质为蛋白类物质。
【图文】：

对大肠杆菌的最大抑菌圈达１４．８３ｍｍ，对金黄色葡萄球菌的最大抑菌圈达逡逑１５．００ｍｍ，，对两种指示菌都有较好抑制作用（抑菌圈直径均含１０ｍｍ）的菌株有逡逑ＹＢ１、ＹＢ５和ＹＢ７，图２．１，２．２显示的是菌株对指示菌（金黄色葡萄球菌和大逡逑肠杆菌）的抑制作用。逡逑表２．２芽抱杆茵对致巧菌的抑茵圈直径逡逑Ｔａｂｌｅ邋２．２邋Ｉｎｈ化ｉｔｉｏｎ邋ｚｏｎｅ邋ｏｆ邋ｐａ化ｏｇｅｎｉｃ邋ｂａｃ化ｒｉａ邋ｂｙ邋另３。７／始逡逑菌株邋人肠杆茵抑菌曖直辑（ｍｍ）逦金

本文编号：2526417