陕西林麝肺源致病性大肠埃希菌分离鉴定及药敏试验

发布时间：2019-08-17 19:57

【摘要】：为分析致林麝肺炎的病原菌,从发病死亡的林麝肺脏进行细菌分离,对分离所得细菌进行微生物学和生化特性鉴定及动物试验。细菌分离结果显示,病死林麝肺脏主要为2种不同菌落形态的细菌,经挑纯后,测定其16 S rRNA序列,发现2株细菌均为大肠埃希菌,菌株1与Escherichia coli O104:H4序列同源性均为100%,菌株2与Escherichia coli O_(78)序列同源性为100%。用2株菌进行动物试验,发现2株大肠埃希菌对小鼠的致死率均为75%;药敏试验结果表明,头孢类(头孢唑啉、头孢曲松)和单环β内酰胺类(氨曲南)对2株林麝肺部致病性大肠埃希菌均敏感;氨基糖苷类(链霉素)对其均中度敏感;对其他类别抗生素均呈现不同程度的耐药性。
【图文】：

菌体形态,林麝

箱内培养２４ｈ后，观察菌落种类及相对数量，记录菌落特征。挑取单个菌落进行革兰染色并镜检，，观察疑似病原菌菌体的形态，并划线接种于普通琼脂、麦康凯琼脂和鲜血琼脂，３７℃恒温培养箱内培养２４ｈ后，观察并记录菌落特征，同时挑取单菌落进行革兰染色镜检，观察其菌体形态。将分离培养得到的典型菌落，挑取单菌落划线接种于三糖铁琼脂斜面，进行纯化培养，取单菌落接于于ＬＢ液体培养基，３７℃、２００ｒ／ｍｉｎ摇床进行过夜培养增菌，保菌备用。１．２．２．２生化试验将菌液接种于普通培养基和麦康凯培养基，３７℃恒温培养箱内培养２４ｈ后，挑取单菌落分别进行糖发酵试验（葡萄糖、蔗糖、芽糖、乳糖）、ＭＲ试验、ＶＰ试验、靛基质试验、柠檬酸盐利用试验，每个试验分别重复３次。根据《伯杰氏细菌鉴定手册》判定试验结果［７］。１．２．２．３１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ鉴定取１ｍＬ菌液，沸水加热１０ｍｉｎ，冷却１５ｍｉｎ，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ，取上清液作为ＰＣＲ反应的ＤＮＡ模板。依据罗燕等报道的用１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ的通用引物２７Ｆ和１４９２Ｒ进行ＰＣＲ扩增［８］。ＰＣＲ产物送西安擎科泽西生物科技有限责任公司进行测序。１．２．３动物试验将试验小鼠分为３组，对照组（Ｃ组）、试验组（Ｇ１）和试验组（Ｇ２）。试验前禁食、禁水２４ｈ。Ｇ１组小鼠腹腔注射菌株１菌液１ｍＬ／只（约含细菌２×１０９ＣＦＵ）。Ｇ２组小鼠同方法同剂量注射菌株２菌液。Ｃ组小鼠同方法注射生理盐水１ｍＬ／只。攻菌后，各组分笼

序列,菌株,电泳,产物

表１分离菌株的生理生化鉴定结果Ｔａｂｌｅ１Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆ２ｉｓｏｌａｔｅｓｉｎｍｕｓｋｄｅｅｒ菌株编号Ｓｔｒａｉｎｎｕｍｂｅｒ糖发酵试验Ｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ葡萄糖ＧＬＵ蔗糖ＳＡＣ麦芽糖ＭＡＬ乳糖ＬＡＣＭＲ试验ＭＲＶＰ试验ＶＰ靛基质试验Ｉｎｄｏｌｅ柠檬酸盐利用试验Ｃｉｔｒａｔｅ１＋＋＋＋＋－＋－２＋＋＋＋＋－＋－注：糖发酵试验：“＋”表示产酸产气；“－”表示不发酵。其他试验：“＋”表示阳性；“－”表示阴性。Ｎｏｔｅ：Ｉｎｐｅｎｔａｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｓｔ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇａｓａｎｄａｃｉｄ；“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｏｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎｏｔｈｅｒｔｅｓｔｓ，“＋”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｐｏｓｉｔｉｖｅ；ａｎｄ“－”ｓｔａｎｄｓｆｏｒｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｍ．ＤＮＡ标准ＤＬ２０００；１、２．菌株１；３．阴性对照；４、５．菌株２Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１，２．Ｓｔｒａｉｎ１；３．Ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ；４，５．Ｓｔｒａｉｎ２图２分离菌株的１６ＳｒＲＮＡＰＣＲ产物电泳结果Ｆｉｇ．２Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ１６ＳｒＲＮＡＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｔｒａｉｎｓ将所测得的基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ中已有的序列进行比对，选取同源性高的菌株并结合菌株的生理生化特性对所测菌株进行鉴定。菌株１
【作者单位】：西北农林科技大学动物医学院;
【分类号】：S858.94

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