绵羊肺源性致病性大肠杆菌的分离与鉴定

发布时间：2019-09-04 18:40

【摘要】：【目的】近年来,羊呼吸系统疾病日益频发,由肠外致病性大肠杆菌感染引起的呼吸道疾病也日渐增多,给养羊业带来了一定经济损失。本文旨在确定新疆石河子地区某羊场表现为呼吸道感染症状的病死羔羊的细菌性病原及其特性。【方法】采用细菌常规分离鉴定结合16S rRNA基因序列分析的方法从发病羔羊的肺脏中分离鉴定细菌,并对分离株进行药敏试验、特异基因PCR检测、小鼠致病性试验及肺脏组织的病理学观察。【结果】从病死羔羊肺脏组织分离得到一株致病性大肠杆菌,该分离株呈多重耐药现象,检测到iutA、fyuA和ireA三种毒力基因;病变肺脏肺泡壁毛细血管充血,界限不清,支气管管腔充血,周围淋巴细胞浸润、增生。【结论】从病死羔羊肺中分离的细菌性病原是肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)。
【图文】：

2808微生物学通报Microbiol.China2017,Vol.44,No.12Tel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn图1发病羔羊病变肺脏组织和分离菌株革兰氏染色结果Figure1PathologicallesionsoflamblungtissueandbacterialGramstainingresults注：A：箭头所指为发生肉变的肺脏组织；B：分离菌株革兰氏染色镜检结果(1000×).Note:A:Pathologicallesionsoflamblungtissue;B:ResultsofGramstainingundermicroscopy(1000×).表2分离菌株生化鉴定结果Table2Biochemicalidentificationresultsofisolatedstrain生化鉴定项目Biochemicalidentificationitems结果Results生化鉴定项目Biochemicalidentificationitems结果Results生化鉴定项目Biochemicalidentificationitems结果Results丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶APPA侧金盏花醇ADO吡咯烷基芳胺酶PyrAL-阿拉伯醇IARLD-纤维二糖dCELβ-半乳糖苷酶BGAL+H2S产生β-N-乙酰葡萄糖苷酶BNAG谷氨酰芳胺酶AGLTpD-葡萄糖dGLUγ-谷氨酰转移酶GGT葡萄糖发酵OFF+β-葡萄糖苷酶BGLUD-麦芽糖dMAL+D-甘露醇dMAN+D-甘露糖dMNE+β-木糖苷酶BXYLβ-丙氨酸芳酶BAlapL-脯氨酸芳胺酶ProA酯酶LIP古老糖PLE酪氨酸芳胺酶TyrA+尿素酶URED-山梨醇dSOR+蔗糖SAC+D-塔格糖dTAGD-海藻糖dTRE+柠檬酸盐(盐)CIT丙二酸盐MNT5-酮-葡萄糖苷5KG+乳酸盐产碱ILATk+α-葡萄糖AGLU琥珀酸盐产碱SUCT+N-乙酰-β-半乳糖氨酶NAGAα-半乳糖苷酶AGAL+磷酸酶PHOS氨基乙酸芳酶GlyA鸟氨酸脱羧酶ODC赖氨酸脱羧酶LDC+组氨酸同化IHISaCOURMARATE+β-葡萄糖苷酸酶BGUR+

郭强强等:绵羊肺源性致病性大肠杆菌的分离与鉴定2809Tel:010-64807511;E-mail:tongbao@im.ac.cn;http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn图2分离株16SrRNA基因的PCR结果Figure2Determinationofisolatestrain16SrRNAgenebyPCR注：M：DL2000分子量标准；110：分离株；11：阴性对照.Note:M:DL2000marker;110:Isolatestrain;11:Negativecontrol.2.4分离株致病性试验结果试验组小鼠感染后双目紧闭，被毛潮湿杂乱，呈腹式呼吸，濒死小鼠表现为全身颤抖，6h内全部死亡(100%)，而对照组小鼠无死亡。剖检发现死亡小鼠肝脏肿大，边缘有出血点，脾脏肿大变黑，肺脏充血及出血，局部出现坏死。无菌采集小鼠肺脏、肝脏、脾脏，均分离到与注射菌一致的大肠杆菌。2.5药物敏感性试验结果按CLSI标准判断分离菌株对青霉素、阿莫西林、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、阿奇霉素和克林霉素等14种抗生素耐药；对头孢唑啉、丁胺卡那和多粘菌素B中度耐药；对头孢他啶、头孢哌酮、氧氟沙星和米诺环素敏感。2.6ExPEC毒力因子扩增结果以细菌DNA为模板，对9种ExPEC毒力因子进行PCR检测，扩增到iutA(314bp)、fyuA(787bp)和ireA(254bp)(图3)，且扩增片段序列与GenBank参考序列的相似性大于99%。未检测到papA、sfaS、focG、hlyD、afa和vaT等基因。2.7病理组织学观察结果病死羔羊肺脏支气管管腔充血，淋巴管扩张，周围淋巴细胞浸润、增生(图4A)，肺脏肺泡壁毛细血管充血，肺泡腔内淋巴细胞浸润(图4B)；人工感染小鼠肺脏肺泡腔内充满渗出物，出现肺泡性肺气肿(图4C)，肺脏血管管腔充血，淋巴细胞增生，肺泡周围炎性细胞浸润(图4D)。3结论与讨论牛羊呼吸道感染疾病日渐普遍，，仅在美
【作者单位】： 石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室;
【基金】：省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室优秀中青年人才培养引导计划专项项目(No.SKLGIH2016A02) 兵团现代农业科技攻关与成果转化计划项目(No.2016AC018)~~
【分类号】：S858.26

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本文编号：2531927