肉牛H-FABP基因分子特征及肌内脂肪沉积相关miRNAs鉴定

发布时间：2019-09-20 08:37

【摘要】：肌内脂肪沉积(intramuscular fat,IMF)是影响肉品质的关键因素,心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因与IMF含量的遗传变异相关,近年来研究发现,微小RNA(miRNA)可以通过结合靶基因H-FABP,进而对IMF的含量进行调节,影响了肉的品质。辽育白牛是辽宁省培育的新品种,为了进一步提高辽育白牛肉品质,本试验就H-FABP进行了研究。本研究中分3个试验部分：试验一：以辽育白牛、夏洛莱牛、本地黄牛、利木赞牛、利复牛、延江牛6个品种牛作为研究对象；通过巢式PCR的方法对该6个品种牛的3'非编码区(UTR)进行扩增,利用分子生物学技术,克隆这6个品种牛3'UTR区的H-FABP基因进行序列测定；成功的克隆出这6个品种牛H-FABP基因3'UTR区,长度在230bp左右。试验二：以试验一的测序序列作为研究对象；(1)通过生物信息学分析软件,对辽育白牛H-FABP基因序列与其他品种牛的基因序列进行比对并寻找单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP).分析结果表明：H-FABP基因的3'UTR区存在SNP,在170bp位点处发生了A/G突变。(2)通过在线软件Segal Lab of Computational Biology探寻辽育白牛H-FABP基因3'UTR潜在的miRNAs.筛选结果表明：突变前后辽育白牛H-FABP基因都能够结合的miRNAs总数有400多个,其中突变前结合而突变后不结合的miRNAs有:btn-miR-421、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、bta-miR-2413、 btn-miR-2461-3p;突变前不结合而突变后结合的miRNAs有：bta-miR-212、bta-miR-411a、 bta-miR-2370-3p、bta-miR-30f、bta-miR-3604、bta-miR-2468。试验三：以辽育白牛、本地黄牛和利木赞牛3个品种牛作为研究对象,根据生工miRNA第一链cDNA合成(加尾法)试剂盒提供的下游通用引物设计特定基因的上游引物并进行荧光定量PCR,基因包括bta-miR-421、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、 bta-miR-2413、bta-miR-2461-3p、bta-miR-212、bta-miR-411a、bta-miR-2370-3p、bta-miR-30f、 bta-miR-3604.bta-miR-2468。试验表明：bta-miR-30f和bta-miR-2468处于波谷,在这三个品种牛中表达量最低,对H-FABP基因的抑制作用可能越低,因此H-FABP对肉牛肌内脂肪沉积起到的调节作用应该最为显著,肉牛的肌内脂肪沉积可能越高；bta-miR-212、 bta-miR-411a、bta-miR-484、bta-miR-2355-5p、bta-miR-2413、bta-miR-2461-3p处于波峰与波谷之间,对H-FABP基因起到一定的抑制,因此H-FABP对肉牛的肌内脂肪沉积应该具有一定的调节作用；bta-miR-2370-3p、bta-miR-3604和bta-miR-421处于波峰,在三个品种牛中表达量最高,对H-FABP基因的抑制作用可能越高,因此肉牛肌内脂肪沉积应该越低。结论：本研究表明：(1)辽育白牛H-FABP基因的3'UTR区的序列长为235bp：(2)辽育白牛H-FABP基因的3'UTR区发生了SNP突变,在170位点处A/G；筛选出能够与H-FABP基因的3'UTR区结合的miRNAs有400多个,在突变前后结合发生改变的有11个miRNAs;(3)通过荧光定量PCR后,bta-miR-2370-3p、bta-miR-3604和bta-miR-421在三个品种牛中表现最为活跃,对H-FABP基因起到负调节的作用越强,因此肉牛肌内脂肪沉积可能越低；反之,bta-miR-30f和bta-miR-2468表现较为沉默,因而对H-FABP基因起到负调节的作用越弱,因此肉牛肌内脂肪沉积可能越多。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S823

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 ;Small but influential:the role of microRNAs on gene regulatory network and 3′UTR evolution[J];遗传学报;2009年01期

2 B.SAILAJA;S.R.VOLETI;D.SUBRAHMANYAM;N.SARLA;V.VISHNU PRASANTH;V.P.BHADANA;S.K.MANGRAUTHIA;;Prediction and Expression Analysis of miRNAs Associated with Heat Stress in Oryza sativa[J];Rice Science;2014年01期

3 罗书芳;崔浪军;王健;屈生宪;;干旱胁迫下15种丹参miRNAs差异表达分析[J];广东农业科学;2013年05期

4 郝力力;李必富;;应用荧光定量PCR对细粒棘球绦虫miRNAs在虫体不同发育阶段表达量的研究[J];中国农学通报;2012年26期

5 Liming Ma;Lianghu Qu;;The Function of MicroRNAs in Renal Development and Pathophysiology[J];遗传学报;2013年04期

6 Gang Wu;;Plant MicroRNAs and Development[J];Journal of Genetics and Genomics;2013年05期

7 Xiang-Shun Cui;Xing-Hui Shen;Shao-Chen Sun;Sun-Wha Cho;Young-Tae Heo;Yong-Kook Kang;Teruhiko Wakayama;Nam-Hyung Kim;;Identifying MicroRNA and mRNA Expression Profiles in Embryonic Stem Cells Derived from Parthenogenetic,Androgenetic and Fertilized Blastocysts[J];遗传学报;2013年04期

8 叶瑞松;习欠云;束刚;王丽娜;王松波;朱晓彤;高萍;江青艳;张永亮;;GnRH引起猪垂体细胞miRNAs表达谱变化[J];畜牧与兽医;2012年S1期

9 陶新;徐子伟;;miRNAs对肠道健康的调控作用及机理[J];动物营养学报;2013年09期

10 郝力力;李锐;李必富;;细粒棘球绦虫miRNAs的鉴定及分析[J];浙江农业学报;2012年04期

相关会议论文 前10条

1 ;A potential role for Chlamydomonas miRNAs in response to environmental changes[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年

2 Ping Xuan;Maozu Guo;Yangchao Huang;;MaturePred:Efficient Identification of MicroRNAs within Novel Plant Pre-miRNAs[A];第五届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2012年

3 Zhen-Dong Xiao;Li-Ting Diao;Jian-Hua Yang;Hui Xu;Mian-Bo Huang;Yong-Jin Deng;Hui Zhou;Liang-Hu Qu;;Systematical identification of cis-elements orchestrating the expressions of miRNAs in humans[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

4 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2011年

5 任波;马迪;李毅;;地高辛标记探针结合化学发光技术快速灵敏检测植物总RNA中的miRNAs方法[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文摘要集[C];2005年

6 任波;马迪;李毅;;地高辛标记探针结合化学发光技术快速灵敏检测植物总RNA中的miRNAs方法[A];中国植物病理学会2005年学术年会暨植物病理学报创刊50周年纪念会论文集[C];2005年

7 戚鹏;韩金祥;鲁艳芹;王传玺;栾中华;卜范峰;;病毒编码的miRNAs:基因表达新的调控因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

8 ;Bioinformatic identification and expression analysis of new microRNAs from Medicago truncatula[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年

9 ;Cell-free miRNAs may indicate diagnosis and docetaxel sensitivity of tumor cells in malignant effusions[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年

10 ;miRNAs involved in Tau expression of BMSCs induced neurons[A];中国神经科学学会第九届全国学术会议暨第五次会员代表大会论文摘要集[C];2011年

相关重要报纸文章 前1条

1 江尚;特异性miRNAs与前列腺癌发病密切相关[N];中国医药报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 陈健德;新生儿脓毒症miRNAs表达谱及其免疫调节作用研究[D];复旦大学;2014年

2 A.B.M.Khaldun;[D];中国科学院研究生院(武汉植物园);2015年

3 成鹰;大肠杆菌和布鲁氏菌脂多糖刺激条件下巨噬细胞差异表达miRNAs的鉴定及其作用机制[D];海南大学;2014年

4 王奕;MiRNAs在白癜风外周血单个核细胞中的表达及miR-3940-5p对T细胞作用机制的研究[D];山东大学;2015年

5 陈科;小鼠子宫内膜mRNAs和miRNAs时空表达与胚胎着床的关系及SPOP对基质细胞蜕膜化的影响[D];重庆医科大学;2015年

6 陈芳;鹅肥肝生成相关miRNAs、基因的鉴定及功能研究和就巢性相关miRNAs的鉴定[D];南京农业大学;2014年

7 顾丽红;北京鸭胚胎期胸肌发育相关基因与miRNAs表达模式鉴定及其互作关系研究[D];西北农林科技大学;2015年

8 侯冬霞;游离脂肪酸在脂肪组织胰岛素抵抗中的作用研究及Solexa技术在miRNAs检测中的应用研究[D];南京大学;2011年

9 李菁;分泌的miRNAs在2型糖尿病和血管再生中的生物学功能研究[D];南京大学;2011年

10 王凤;miRNAs对TBX5的靶向调控及其遗传变异的调控差异在先天性心脏病中的作用[D];复旦大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 荣辉;B.melitensis M5-90及其LPS刺激条件下RAW264.7细胞受CD14影响的miRNAs的作用机制[D];海南大学;2014年

2 李新琼;猪细小病毒感染PK-15细胞前后microRNAs表达谱的研究及部分免疫功能的鉴定[D];四川农业大学;2015年

3 邢艳芳;比较分析线虫参与微重力调控的miRNAs[D];大连海事大学;2016年

4 党春艳;高山离子芥低温胁迫调控的miRNAs及其靶基因的表达分析[D];兰州大学;2013年

5 高蓉芳;人ULK1的表达和纯化及miRNAs对人宫颈癌细胞Hela中G4R1表达调控的研究[D];西北农林科技大学;2016年

6 江冬瑞;人乳腺癌MCF-7细胞在不同HER-2水平下外泌型miRNAs表达谱检测[D];安徽医科大学;2016年

7 杜新;肉牛H-FABP基因分子特征及肌内脂肪沉积相关miRNAs鉴定[D];沈阳农业大学;2016年

8 马苏日古嘎;UC-MSCs条件培养基对HepG2影响的miRNAs差异表达谱分析及miR-3065-5p功能的初步探讨[D];内蒙古大学;2016年

9 孟丽雅;恶性转化BEAS-2B细胞lncRNAs与miRNAs的差异表达[D];郑州大学;2016年

10 赵海军;应用微阵列芯片技术分析先天性巨结肠miRNAs表达谱差异[D];南方医科大学;2016年

，

本文编号：2538716