湖羊不同花纹羔皮毛囊中差异表达MicroRNA的筛选

发布时间：2019-09-26 14:03

【摘要】：本研究以湖羊为研究对象,利用高通量测序技术筛选湖羊大花、中花、小花不同花纹羔皮毛囊中的差异表达miRNA,并对湖羊大花、中花、小花羔羊皮肤组织进行组织学分析；采集6组湖羊全同胞个体(每组大花、中花、小花各一只)的背侧部皮肤组织及毛囊,利用组织学方法和显微观察法研究湖羊羔皮毛囊的组织学特性,结合荧光定量PCR技术,检测差异miRNA在不同个体表达量与毛囊各指标的相关性,筛选出用于后续功能验证的重要miRNA,为进一步探究湖羊羔皮不同花纹的形成提供理论基础。本研究主要结果如下：1、通过高通量小RNA测序技术筛选出36个显著差异表达miRNA,其中小花与中花之间显著差异表达的miRNA有20个,中花与大花间有14个,小花与大花间有13个。在显著差异表达的miRNA中,包括了29个新预测的miRNA,7个已知的miRNA。对这些表达差异显著的miRNA进行靶基因预测,小花与大花间差异miRNA共预测到1008个靶基因,小花与中花间差异miRNA预测到4196个靶基因,中花与大花间差异miRNA预测到2062个靶基因,部分靶基因参与细胞增殖分化、新陈代谢、发育、细胞黏附、离子转运等生物学过程。进一步筛得miRNA-143、miRNA-10a、let-7c, miRNA-199a-3p、let-7i五个已知miRNA和W_004080189.1_7961、NW_004080184.1_6535、NW_004080184.1_6326、 NW_004080165.1_8572,NW_004080166.1_9139、NW_004080181.1_3961、NW_040801/4.1_/26、 NW_004080166.1_10417、NW_004080190.1_13733九个新的miRNA共14个miRNA可作为与湖羊毛囊发育相关的重要候选miRNA。2、在14个候选miRNA中,miRNA-143在大小花间表达差异显著(P0.05), let-7i与NW_004080190.1 13733在大中花间差异显著(P0.05), miRNA-10a、 NW_004080184.1_6326、NW_004080181.1_3961在中小花间差异显著(P0.05),NW_004080165.1_8572在大中花、中小花间均显著差异；其余miRNA表达差异不显著(P0.05)。miRNA-143相对表达量与大花次级毛囊数呈极显著负相关(P0.01),与小花次级毛囊数呈极显著正相关(P0.05)；miRNA-10a的相对表达量与大花次级毛囊直径极显著正相关(P0.01),与小花次级毛囊直径显著负相关(P0.05); let-7i的相对表达量与大花初级毛囊直径显著正相关(P0.05),与中花初级毛囊直径极显著负相关(P0.01), NW_004080184.1_6326, NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733等在大、中、小花组的表达量也分别与大花次级毛囊直径、小花次级毛囊数、中花次级毛囊直径等指标存在相关性。其余miRNA虽然与毛囊相关指标也存在相关性,但鉴于其在大中小花组表达差异不显著,可将其排除在候选miRNA的选择范围之外。初步推测miRNA-143、miRNA-10a、let-7i、NW_004080184.1_6326、 NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733七个miRNA可作为对湖羊羔皮毛囊发育具有重要影响的候选miRNA,在后续试验中进一步验证。
【图文】：

其中一条链被称为过客链（ｐａｓｓｅｎｇｅｒｓｔｒａｎｄ），由于缺乏蛋白质的保护而解，而另一成熟ｍｉ民ＮＡ链被称为引导链（ｇｕｉｄｅ邋ｓｔｒａｎｄ），进入ＲＮＡ诱导沉默复ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ邋ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ邋Ｃｏｍｐｌｅｘ，邋ＲＩＳＣ）中（如图邋１－１）邋口｜］，，并与邋Ａｇｏ邋家族的蛋白质结过与勒！基因的３＇邋－ＵＴＲ区互补配对，对靴基因ｍＲＮＡ进行切割或者翻译抑制。逡逑ＭｉｃｒｏＲＮＡ邋Ｂｉｏｓｙｎ化ｅｓｉｓ逡逑

然后经过反转录得到双链ｃＤＮＡ，再对双链ｃＤＮＡ进行高通量测序分析。若所测物种己逡逑完成基因组测序，则可将已知基因组ＤＮＡ序列数据与ＲＮＡ－ｓｅｑ结果进行比对；若所逡逑测物种没有参考基因组，则需要进行ｄｅ邋ｎｏｖｏ转录组测序研究。具体测序原理见图１－２［５６３。逡逑ｍＲＭＡ逡逑_╁巍觯毙複0—R[１晒凹媂
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S826

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本文编号：2542194