乳房炎患牛乳腺组织来源的成纤维细胞对正常乳腺上皮细胞生物学特性和β-酪蛋白分泌的影响

发布时间：2019-09-26 20:20

【摘要】：奶牛乳房炎是由于机体代谢和生理状态改变、乳房损伤及接触传染性或环境性病原微生物等引起的乳腺炎症反应,是奶牛最常见的疾病之一。乳腺上皮细胞和乳腺间质成纤维细胞(Mammary stromal fibroblast,MSF)是构成乳腺组织最主要的组成细胞,在乳腺的发育、退化、泌乳过程以及炎症相关病症的发生发展中都发挥着重要的作用。现已证实乳腺组织中的上皮细胞和巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等共同构成了乳腺组织的细胞免疫防御体系,共同参与奶牛乳房炎的细胞免疫应答。到目前为止,国内外尚没有关于MSF与奶牛乳腺炎相关关系的直接报道。本研究将通过研究乳腺炎乳腺组织来源的MSF对正常乳腺组织分离的乳腺上皮细胞生物学特性及β-酪蛋白分泌的影响,探究MSF在乳房炎发病过程中的作用,为奶牛乳房炎的防治提供新的研究思路和方向。主要进行的研究和结果如下:本课题以荷斯坦奶牛为研究对象,从奶牛正常乳腺组织中分离乳腺上皮细胞,进行体外培养、纯化和鉴定,然后将其分别与奶牛正常乳腺组织分离的成纤维细胞(Normal MSF,N-MSF)和患乳房炎奶牛乳腺组织分离的成纤维细胞(Inflammation-related MSF,In-MSF)进行体外共培养,通过CCK-8增殖试验、细胞划痕实验、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测法研究In-MSF对乳腺上皮细胞增殖、迁移及凋亡的影响;运用RT-PCR研究In-MSF对TNF-α、IL-6和IL-8 mRNA表达水平的影响;通过ELISA试剂盒检测In-MSF对乳腺上皮细胞β-酪蛋白分泌的影响,进而研究在奶牛乳房炎症状态下,MSF是否对乳腺上皮细胞的生物学特性和β-酪蛋白的分泌有一定的影响。结果显示,与N-MSF相比较,In-MSF可抑制乳腺上皮细胞的增殖和迁移,而对其凋亡没有明显影响,并且上调乳腺上皮细胞中TNF-α和IL-8的mRNA表达水平,而对IL-6的mRNA表达水平没有影响。此外,In-MSF可明显抑制乳腺上皮细胞对β-酪蛋白的分泌。由此表明,在奶牛乳房炎的发生发展过程中,MSF参与乳房的炎症反应过程,并对乳腺上皮细胞的生物学特性及功能产生一定得影响。这一发现从新的角度初步阐明了MSF在奶牛乳房炎症下对乳腺上皮细胞调控作用,将为奶牛乳房炎的预防和治疗提供新的研究方向。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.23

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本文编号：2542311