一株FPV-GZ01猫细小病毒的分离鉴定与遗传进化分析及对猫的致病性研究

发布时间：2019-11-02 19:51

【摘要】：为了解广州地区的猫细小病毒的生物学特性,本实验通过对收集的11份粪便样品进行PCR鉴定以及对鉴定结果为阳性的粪便样品进行血凝实验、理化特性实验以及细胞分离鉴定实验。结果显示,从11份粪便样品中通过PCR方法鉴定出2份阳性的粪便样品。2份阳性的粪便样品均能凝集1%的猪红细胞,且血凝效价为1:128。使用F81细胞对2份阳性粪便样品进行病毒分离,结果显示编号FPV-GZ01的粪便样品在F81细胞上出现细胞病变,成功分离出FPV,编号FPV-GZ02粪便样品未分离到FPV,这可能与粪便中的病毒含量有关。病毒的理化特性结果显示,FPV能够耐酸、碱、加热以及脂溶剂,但对具有DNA细胞毒性的物质不耐受。为了解广州地区猫细小病毒的自然重组、跨宿主传播以及流行变异情况,通过采集疑似感染猫细小病毒的粪便病料进行PCR鉴定,对阳性粪便样品提取基因组DNA,用PCR方法扩增获得病毒全基因组序列,并与GenBank中相关的参考毒株序列进行遗传进化分析,同时对VP2基因与NS1基因主要氨基酸位点进行差异分析。结果表明,成功获得2个猫细小病毒的全基因组序列。核苷酸系统进化分析显示,广州地区猫细小病毒FPV-GZ01、FPV-GZ02与我国其它分离毒株FPV-XJ01、FPVHRB属同一分支,且提示FPV-GZ01、FPV-GZ02由FPV-XJ01进化而来;NS1基因的核苷酸系统进化树显示,FPV存在与CPV-447重组的可能;主要氨基酸位点分析显示,FPV在VP2基因中主要氨基酸位点的遗传变异比CPV保守;在NS1基因上发现FPV-GZ01、FPV-GZ02分别存在不同程度的氨基酸位点突变。为了解广州地区猫细小病毒的感染性和致病性,本实验采用口服病毒的方法,使用FPV-GZ01细胞分离毒株对幼猫进行动物实验。结果显示,感染FPV的幼猫出现了体温升高发热的现象,其中1只实验组幼猫出现典型的双相热特征;体重变化方面,实验组幼猫均出现体重不断下降的情况,表明感染FPV能够导致幼猫食欲下降,精神萎靡,体重减轻;FPV-GZ01能够引起不同程度的组织损伤,其中主要的病变部位在胃肠道组织,FPV主要侵染胃肠道组织的黏膜上皮细胞,造成细胞变性、坏死、脱落。此外,FPV对猫具有较大的危害,能引起感染幼猫的死亡。本实验通过广州地区猫细小病毒的分离鉴定、遗传进化分析以及动物实验方面的研究,为了解该地区猫细小病毒的流行情况提供参考,也为研究猫细小病毒的对猫的感染性和致病性奠定基础。
【图文】：

pLBVector限制性酶切图谱

PCRR产物克隆的的操作流程程
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S858.293

【参考文献】

相关期刊论文 前6条

1 刘碧涛;任常宝;张晓战;许冬蕾;郑良焰;唐兆新;;猫细小病毒的分离与鉴定[J];动物医学进展;2013年09期

2 亢文华;赵凤龙;郝霖雨;潘春刚;;猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[J];中国畜牧兽医;2008年10期

3 刘明慧;石践;单振振;袁宝;任文陟;;猫细小病毒的分离与鉴定[J];吉林畜牧兽医;2008年10期

4 乔军,孟庆龄,夏咸柱,何宏彬;用PCR法检测东北虎感染猫细小病毒的研究[J];畜牧与兽医;2001年05期

5 张安民;犬、猫体温变化的疾病诊断[J];湖北畜牧兽医;2001年03期

6 夏咸柱,陈跃朋,孙永祥,杨盛华,武银莲,曹福源,李克东,徐成英,吴启华,张建平,凌铭德,殷震;猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[J];兽医大学学报;1986年02期

，

本文编号：2554677