绵羊kisspeptin介导的GnRH基因表达调控机制的研究

发布时间：2019-11-06 00:45

【摘要】：遗传学的研究表明,KISS-1和Gn RH是控制包括绵羊在内的动物发情的关键基因。虽然已知绵羊Gn RH的表达受kisspeptin的调控,但具体的分子机理尚不清楚。本研究以季节性繁殖的阿勒泰绵羊为实验动物,利用双荧光素酶报告系统、RT-PCR和实时荧光定量PCR技术,并结合生物信息学分析手段,对绵羊kisspeptin介导的Gn RH基因表达调控的机制进行了研究。首先,利用胚胎日龄为55~90天的绵羊胚胎下丘脑组织,成功建立了原代绵羊下丘脑神经细胞培养体系,体外培养的胎羊下丘脑细胞保留了在体内下丘脑神经元的形态和功能特征;然后,成功克隆了绵羊Gn RH基因启动子区-2313bp~+173bp不同长度的片段,并构建了荧光素酶报告基因重组载体p GL3-1、p GL3-2、p GL3-3、p GL3-4、p GL3-5、p GL3-6、p GL3-7、p GL3-8;第三,通过双荧光素酶报告系统检测发现,p GL3-1、p GL3-2、p GL3-3、p GL3-4、p GL3-5、p GL3-6、p GL3-7、p GL3-8与空载体p GL3-Basic相比有明显的活性(P0.05),其中p GL3-1、p GL3-3、p GL3-4、p GL3-5、p GL3-6、p GL3-7、p GL3-8载体的表达活性较为相似(P0.05),而p GL3-2载体的表达活性极显著高于空载体及其他载体(P0.05),进一步的生物信息学分析表明,绵羊Gn RH启动子区存在有转录因子Otx-2的结合位点;最后,运用RT-PCR和荧光实时定量PCR技术,对KISS-1及Otx-2、Gn RH、MT1基因的组织表达谱进行了研究,并从细胞和个体水平证明kisspeptin通过Otx-2对Gn RH基因的表达进行调控。综合以上试验结果,得出如下结论:绵羊Gn RH基因核心启动子位于-1843bp~-1503bp大约300bp的区域内,而在-2313bp~-1843bp的区域内可能有负转录调控元件存在;转录因子Otx-2可结合于Gn RH启动子-1508bp~-1503bp位点,kisspeptin可能通过Otx-2调控Gn RH基因的表达。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S826

【参考文献】

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本文编号：2556432