HMGCR与PKC在猪圆环病毒2型感染过程中的作用及猪圆环病毒2型疫苗的初步研制

发布时间：2019-11-08 17:25

【摘要】：猪圆环病毒病(porcine circovirus diseases and porcine circovirus-associated diseases,PCVD/PCVAD)是由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起的、影响世界养猪业的重要病毒性传染病之一。目前,没有治疗该病的特效药物。一方面是由于该病毒生长缓慢,复制周期较长,且体外培养的病毒滴度较低;另一方面是由于PCV2病毒的基因组小、编码的蛋白数量较少,且病毒致病机制不太明晰,不利于靶向抗病毒药物的研发。因此,研究PCV2病毒与宿主的相互作用、PCV2疫苗的制备,对于进一步了解该病毒的致病机理、设法阻断病毒的复制、减少病毒的传播具有非常重要的理论意义和实际应用价值。3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)是甲醛戊酸途径中胆固醇生物合成的限速酶,且参与了多种病毒的感染过程。本实验室的前期研究表明,HMGCR与PCV2感染呈负相关关系,抑制HMGCR能促进PCV2的感染。蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)是细胞内磷酸化通路的关键磷酸化酶,也参与多种病毒的感染过程,但PKC是否影响PCV2的感染过程尚未见报道。本研究用实时定量PCR和Western blot等技术分析了PKC和HMGCR在体外对PCV2感染的影响。结果发现,PKC分别磷酸化JNK1/2和HMGCR,从而激活JNK1/2、抑制HMGCR,最终促进PCV2增殖;HMGCR通过下调JNK1/2磷酸化水平达到抑制PCV2增殖的目的;PKC和HMGCR参与了PCV2感染的不同阶段,其中HMGCR在感染的早期阶段抑制病毒的感染,而PKC在感染后期促进PCV2的感染。另外,激光共聚焦实验初步表明,HMGCR在PCV2感染早期与病毒Cap蛋白相互作用,PKC在感染后期与病毒Rep蛋白相互作用。目前,注射疫苗是预防PCV2感染的主要措施,但大部分市售的PCV2疫苗的免疫效果仍有待提高,主要是由于制备疫苗的病毒滴度较低。本研究用D-氨基葡萄糖处理前期构建的PCV2敏感细胞系PK-15-IL-2,同时优化了PCV2的微载体培养系统,获得了高滴度的PCV2病毒,并比较了该病毒与市售PCV2疫苗的免疫效果。结果表明,本研究优化的微载体培养方法可以提高PCV2的产量;制备的PCV2灭活病毒具有较高的免疫保护效力,其免疫效果优于多种国产灭活疫苗。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：S858.28

【参考文献】

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本文编号：2557956