羊地方性鼻内腺瘤细胞癌变相关基因启动子区甲基化程度和转录水平的研究
发布时间：2019-11-12 13:03
【摘要】：地方性鼻内腺瘤是一种慢性、进行性、接触性传染病,潜伏期长,且一旦出现临床症状,无一例外死亡,严重威胁羊的种群安全。目前对于区别阳性感染羊只还没有比较成功的方法。本研究探讨羊地方性鼻内腺瘤组织中甲基转移酶和细胞癌变相关基因的转录水平和启动子区甲基化程度,并研究基因甲基化程度对其转录水平的影响。运用SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR和甲基化特异性PCR检测20份正常鼻内腺组织和24份鼻内腺瘤组织中抑瘤基因P73、P53、GADD45G、CHFR、THBS1、 MGMT,转录因子CEBPA,原癌基因KRAS、NRAS、C-myc,甲基转移酶基因DNMT3a、 DNMT3b、DNMT1,以及与细胞增殖和转移有关的基因EGFR的转录表达水平以及所选基因启动子的甲基化程度,并对甲基转移酶基因的转录表达水平对癌变相关基因启动子区甲基化状态的影响以及癌变相关基因启动子区的甲基化程度对该基因转录表达水平的影响进行了研究分析,揭示ENTV致瘤后病变部位细胞癌变相关基因转录与其启动子区甲基化程度的关联,并筛选出能用于肿瘤诊断的标志物候选基因,并为阐明ENTV致瘤的表观遗传机制提供参考。研究结果如下：1.基因启动子区甲基化研究结果 所选6个抑瘤基因中仅CHFR、GADD45G和THBS1检测出甲基化,CHFR基因在鼻内腺瘤组织中甲基化阳性率为58.2%,在正常鼻内腺组织中基化阳性率为60%,两组间无统计学意义；THBS1基因在鼻内腺瘤组织中甲基化阳性率为79.2%,在正常鼻内腺组织中未检测出甲基化,两组间有统计学意义(P0.05); GADD45G基因在鼻内腺瘤组织中完全甲基化率为58.5%,不完全甲基化率为25%,在正常鼻内腺组织中未检测出甲基化,两组间有统计学意义(P0.05)。在原癌基因中仅C-myc基因检测出甲基化,C-myc基因在鼻内腺瘤组织中甲基化阳性率为54.2%,在正常鼻内腺组织中未检测出甲基化,两组间有统计学意义(P0.05)。转录因子CEBPA基因在鼻内腺瘤组织中甲基化阳性率为79.2%,在正常鼻内腺组织中未检测出甲基化,两组间有统计学意义(P0.05)。肿瘤转移相关基因EGFR在鼻内腺瘤组织中甲基化阳性率为87.5%,在正常鼻内腺组织中甲基化阳性率为75%,两组间无统计学意义。甲基转移酶基因中仅DNMT1和DNMT3b检测出甲基化,DNMT1和DNMT3b在鼻内腺瘤组织中的甲基化阳性率分别为20.8%、41.7%,在正常鼻内腺组织中均未检测出甲基化,两组间有统计学意义(PO.05)。2.转录表达水平研究结果 选取DNMT1基因在正常鼻内腺组织中的转录表达量作为对照,抑癌基因中GADD45G、THBS1基因存在异常转录表达,THBS1基因在20份正常鼻内腺组织中相对转录表达水平为0.38±0.25,在19份甲基化鼻内腺瘤组织中相对转录表达水平为1.05±0.32,在5份非甲基化鼻内腺瘤组织中为1.03±0.21; GADD45G基因在20份正常鼻内腺组织中相对转录表达水平为0.47±0.72,在14份完全甲基化鼻内腺瘤组织中为2.48±0.82,在6份不完全甲基化鼻内腺瘤组织中为1.42±0.33,在4份非甲基化得鼻内腺瘤组织中为0.46±0.41。原癌基因中仅C-myc出现异常表达,在20份正常鼻内腺组织中C-myc基因相对转录表达水平为-0.42±1.90,在13份甲基化的鼻内腺瘤组织中为-1.37±0.58,在11份非甲基化的鼻内腺瘤组织中为-0.98±0.21。转录因子CEBPA基因在20份正常鼻内腺组织中相对转录表达水平为0.85±0.24,在19份甲基化的鼻内腺瘤组织中为-0.76±0.26,在5份非甲基化的鼻内腺瘤组织中为0.79±0.11；肿瘤转移相关基因EGFR在鼻内腺瘤组织和正常鼻内腺组织中都未见其表达。甲基化转移酶基因中仅DNMT3b基因出现异常转录表达,在20份正常鼻内腺组织中DNMT3b基因相对转录表达水平分别为1.39±0.88,10份甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT3b为0.22±0.63,14份非甲基化鼻内腺瘤组织中为1.41±0.71,两者间有统计学差异(P0.05)。20例正常鼻内腺组织中DNMT1基因相对转录表达水平分别为0.00±0.53、5例甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT1相对转录表达水平为-0.64±0.56,19例非甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT1为-0.32±0.61,两者间无统计学差异。综合可知,原癌基因C-myc,转录因子CEBPA,抑癌基因GADD45G、THBS1和甲基转移酶基因DNMT1和DNMT3b在鼻内腺瘤组织中存在异常甲基化。甲基转移酶DNMT3b和原癌基因C-myc mRNA转录表达上调；转录因子CEBPA转录表达上调,但在讨论中可知与其他肿瘤研究结果不同；抑癌基因THBS1转录表达下调；肿瘤转移相关基因EGFR存在甲基化,但未出现表达。经过统计学分析,表明鼻内腺瘤组织中DNMT3、THBS1、GADD45G和C-myc基因转录表达水平与相对应基因启动区的甲基化调控有一定关联；在甲基转移酶基因中DNMT3b的表达上调可能与部分细胞癌变相关基因出现过度甲基化修饰有一定关联；肿瘤转移相关基因EGFR零表达可能与地方性鼻内腺瘤不发生转移相关：C-myc、GADD45G和THBS1基因甲基化具有肿瘤特异性,其基因的甲基化修饰与鼻内腺瘤发生发展有关。
【图文】：
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本文编号：2559785
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