西北地区奶牛贾第虫和隐孢子虫流行病学调查及基因型研究

发布时间：2019-11-13 20:44

【摘要】：贾第虫(Giardia)和隐孢子虫(Cryptosporidium)是重要的人兽共患寄生性原虫,主要传播途径包括直接接触或摄入污染的食物和饮水而感染,严重威胁着动物生长发育,给畜牧养殖业带来巨大经济损失,同时,也潜在地威胁着人类健康。针对贾第虫病和隐孢子虫病,尚未研发出有效的药物和疫苗。掌握奶牛贾第虫和隐孢子虫的感染情况、流行特点及种/基因型分布等可为防控奶牛贾第虫病和隐孢子虫病提供基本依据。本研究选择了甘肃省和宁夏回族自治区3个地市的19个奶牛场,于2012年11月至2014年03月采集了不同年龄阶段的奶牛的粪便样品,对奶牛贾第虫和隐孢子虫感染情况进行调查研究,并对贾第虫和隐孢子虫分离株进行分子鉴定和基因分型研究。1.采用福尔马林-乙酸乙酯沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法等方法对采集到的2945份奶牛粪便样品进行显微镜检测,并采用分子生物学方法对镜检为阳性样品及疑似阳性样品进行检测。结果表明,107份样品呈贾第虫阳性的,隐孢子虫阳性样品为150份,贾第虫和隐孢子虫感染率分别为3.63%和5.09%;贾第虫在春季的感染率最高,为5.79%,而隐孢子虫则在秋季感染率最高,为6.96%;在年龄方面,3月龄及以下的奶牛的贾第虫和隐孢子虫感染率最高,分别为10.45%和14.01%。2.为掌握奶牛贾第虫的遗传特征,通过对107个贾第虫分离株进行分子鉴定,采用巢式P CR方法特异性扩增TPI基因,测定序列,并在NCBI核酸序列数据库上进行Blast检索,应用Clustal X软件比对序列以及应用Mega软件构建分子进化树,以期阐明所分离的贾第虫种类和基因型关系。结果表明:PCR扩增产物片段大小为530bp,与预期结果相一致。进化树分析结果显示107个分离株均为肠贾第虫(Giardia intestinalis),但序列之间存在差异性,其中1个分离株属于聚集体A,106个分离株属于聚集体E。3.同样,对隐孢子虫分离株进行分子生物学方法鉴定,采用PCR方法扩增SSU rRNA基因,并对所得序列进行测序和比对分析。PCR扩增结果显示目的片段大小为830bp。序列分析发现在150份奶牛粪便样品中分离到36株为安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni),24株为芮氏隐孢子虫(Cryptosporidium ryanae),70株为牛隐孢子虫(Cryptosporidium bovis)和20株为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum),其中以C.bovis感染率最高。4.此外,利用MLST技术对奶牛C.andersoni分离株进行亚型分析。20个分离株被成功分型,主要为2个MLST亚型,即A4,A4,A4,A1和A5,A4,A2,A1。甘肃省奶牛C.andersoni的遗传多样性较宁夏回族自治区更为明显。综上所述,本次对西北部分地区奶牛贾第虫和隐孢子虫感染情况调查显示感染主要以犊牛(3月龄及以下)为主,但感染季节存在差异性,贾第虫以春季感染为主,而隐孢子虫以秋季感染为主。隐孢子虫感染主要以C.bovis最为常见,且C.andersoni具有遗传多样性特征;感染奶牛的贾第虫则以G.intestinalis为主。推测主要因幼年动物免疫系统不健全等原因,其抗贾第虫和隐孢子虫能力相对较弱。应加强对上述疾病的防治。
【图文】：

图 2-1 贾第虫形态学观察结果（400×）注：A：包囊；B：滋养体Fig.2-1 Morphological observations of Giardia（400×）Note：A: oocyst; B: trophczoite.1.2 隐孢子虫卵囊形态特征由图 2-2 可以看出，，经饱和蔗糖溶液漂浮法后，可观察到隐孢子虫卵囊呈椭圆形

19图 2-2 饱和蔗糖溶液漂浮法检测隐孢子虫结果（400×）ination of Cryptosporidium oocysts by saturated sucrose solution flo
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S858.23

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本文编号：2560479